معلومة

هل العزلة لها أي تأثير على سلوك الفأر؟

هل العزلة لها أي تأثير على سلوك الفأر؟


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

أنا أعمل مع الكثير من الفئران. لا أقوم بأي تحليل سلوكي ، أنا فقط أقوم بحقن الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي وإجراء فحوصات التصوير. ومع ذلك ، فقد لاحظت بعض تأثير العزلة على سلوك الفأر. عادة ، يتم إيواء الفئران في مرفق الحيوانات بجامعتنا مع ما لا يزيد عن 5 فئران في قفص. في بعض الأحيان ، يتم وضع ماوس واحد في قفص بمفرده. عندما أذهب لإحضار هذه الفئران المنفردة من أقفاصها ، تبدو أكثر تقلبًا ، وأصعب في الإمساك بها ، وأكثر احتمالًا أن تعضني من الفئران المحفوظة في مجموعات.

بالإضافة إلى ذلك ، قام مكتب الموارد الحيوانية لدينا ، المسؤول عن إدخال شحنات الفئران ووضعها في أقفاص ، مؤخرًا بتغيير طريقة وضع الفئران لدينا في أقفاص ، حيث تكون مجموعة من 4 فئران طبيعية ، ويتم وضع أي فئران متبقية في أقفاص مع أخرى. الفئران ، مما يجعل قفص الفئران 5. هذا يعني أنني لم أرَ فأرًا واحدًا في قفص منذ فترة. لذلك قد لا أكون الوحيد الذي لاحظ تأثير العزلة على صحة الحيوان.

لقد سمعت عن الدراسات التي أجريت على القرود من قبل BF Skinner ، حيث تسبب في اكتئاب حاد للغاية ومشاكل نفسية أخرى من خلال عزلهم ، لذلك أظن أنه قد تم إجراء دراسات مماثلة على الفئران باستخدام أساليب كمية أكثر بكثير مما كنت قادرًا على القيام به.


نعم ، هذا ليس جيدًا:

العزلة الاجتماعية (SI) تربية القوارض تسبب أ مجموعة متنوعة من التغييرات السلوكية، بما فيها فرط الحركة والقلق والاندفاع والعدوانية وعجز التعلم والذاكرة. قد تكون هذه التشوهات السلوكية في القوارض مرتبطة بالأعراض لدى المرضى الذين يعانون من اضطرابات نفسية عصبية ، مثل اضطراب فرط الحركة ونقص الانتباه ، واضطراب الوسواس القهري ، والتوحد ، والفصام ، والاكتئاب ...

أيضا:

تشير النتائج التي توصلنا إليها إلى أن الشذوذ السلوكي الناجم عن [العزلة الاجتماعية] هو أ المركب السلوكي النفسي المرتبط بالعديد من الأعراض السريرية التي لوحظت في الاضطرابات العصبية والنفسية ، بما في ذلك اضطراب فرط الحركة ونقص الانتباه والفصام والاكتئاب، وأن الفئران التي تمت تربيتها باستخدام نظام SI هي نموذج حيواني مفيد لدراسة الفيزيولوجيا المرضية / التسبب في هذه الأمراض.

هناك هذا:

في المقابل ، تعد العزلة الاجتماعية طويلة المدى نموذجًا لدراسة العواقب السلوكية والكيميائية العصبية لحرمان القوارض من التفاعل الاجتماعي. العديد من الأعراض الناجمة عن العزلة طويلة الأمد تشبه تلك التي تظهر في اضطرابات الاكتئاب والقلق. علاوة على ذلك ، من المعروف أن العزلة طويلة المدى لذكور الفئران تحفز السلوك العدواني والعدواني ، مثل الهجمات.

وهذا:

تشير هذه البيانات إلى أن العزلة طويلة الأمد قد تحفز تغييرات وظيفية في حساسية مستقبلات ألفا 2 في نظام نورادرينرجيك ...

وهذا:

في هذه الدراسة وجدنا أن العزلة الاجتماعية رفع مستويات القلق من الفئران…

التأكيد على كل ما عندي.

هناك الكثير من اللحوم في تلك الدراسات ، وخاصة الورقة التي استشهدوا بها في مقدماتهم. يستكشف البعض منهم ، بالإضافة إلى البعض الآخر ، تأثير العزلة بالإضافة إلى المواد الأخرى. يمكن أن يؤثر بشكل مطلق على دراستك ، ولا سيما الدراسات القائمة على السلوك أو التعبير. منزل الفأر الخاص بك جيد لتغيير ممارساتهم.


الحدود في علم الأعصاب السلوكي

انتماءات المحرر والمراجعين هي الأحدث التي يتم توفيرها في ملفات تعريف بحث Loop وقد لا تعكس موقفهم في وقت المراجعة.



مشاركه فى

مكالمات العزل في الجراء المنزلية: الاتساق الفردي عبر الوقت والمواقف

Aurélie Verjat، Laboratoire d’Ethologie Expérimentale et Comparée E.A. 4443 (LEEC) ، جامعة باريس 13 ، سوربون باريس سيتي ، F-93430 Villetaneuse ، فرنسا.

Laboratoire d’Ethologie Expérimentale et Comparée E.A. 4443 (LEEC) ، جامعة باريس 13 ، فيلتانوس ، فرنسا

Laboratoire d’Ethologie Expérimentale et Comparée E.A. 4443 (LEEC) ، جامعة باريس 13 ، فيلتانوس ، فرنسا

Laboratoire d’Ethologie Expérimentale et Comparée E.A. 4443 (LEEC) ، جامعة باريس 13 ، فيلتانوس ، فرنسا

Aurélie Verjat، Laboratoire d’Ethologie Expérimentale et Comparée E.A. 4443 (LEEC) ، جامعة باريس 13 ، سوربون باريس سيتي ، F-93430 Villetaneuse ، فرنسا.

Laboratoire d’Ethologie Expérimentale et Comparée E.A. 4443 (LEEC) ، جامعة باريس 13 ، فيلتانوس ، فرنسا

Laboratoire d’Ethologie Expérimentale et Comparée E.A. 4443 (LEEC) ، جامعة باريس 13 ، فيلتانوس ، فرنسا

الملخص

تنبعث نداءات العزل من نسل العديد من أنواع الثدييات عند فصلها عن مقدمي الرعاية والأشقاء. تشير بعض الدراسات إلى أن معدلات نداء العزلة تشكل سمة فردية متسقة ، ويظهر البعض الآخر أن الصغار يضبطون معدل نطقهم وفقًا للوضع الحالي. درسنا هذا في فأر المنزل (المصحف العضلي المنزلي) من خلال استكشاف الاتساق الفردي في معدلات مكالمات عزل الجراء وتعديلها المحتمل في المواقف الاجتماعية المختلفة. أجرينا تجارب تضمنت ثلاث معالجات (قياسات متكررة) خلال أيام متتالية ، بدأت جميعها بعزل أولي للجرو ، يليه (أ) لم شمل مع الأم وزملائها وعزلة ثانية فيما بعد ، (ب) مواجهة جرو معزول مع إشارات من عشها الخاص أو (ج) مع إشارات من ذكر بالغ غير مألوف. تسبب العلاج الأول في زيادة ملحوظة ، بينما تسبب العلاج الآخر في انخفاض كبير في معدلات مكالمات عزل الجراء. أظهر الجراء اختلافات فردية ثابتة في معدلات المكالمة الأولية عبر الأيام الثلاثة للاختبار (أيام ما بعد الولادة 9-11) ، والتي ارتبطت بشكل كبير بالاختلافات الفردية في معدلات الاتصال أثناء العلاجات المختلفة. نستنتج أن مكالمات عزل الجراء تمثل سلوكًا متسقًا يشبه السمات في فأر المنزل ، والذي يمكنه أيضًا التعبير عن المرونة في الاستجابة للإشارات الاجتماعية.


العزلة وترنسفكأيشن وثقافة طويلة الأمد للخلايا العضلية القلبية للفأر والجرذان البالغة

نقدم هنا ، بروتوكولا لعزل تعداء ، وثقافة طويلة الأجل للماوس الكبار والفئران العضلية.

الهدف من هذا الفيديو هو إظهار بروتوكول موحد لعزل خلايا عضلة القلب البالغة ، والثقافة طويلة الأمد ، وترنسفكأيشن. لا يزال عزل واستنبات خلايا عضلة القلب من الفئران أو الفئران طريقة أساسية للتحقيق في بيولوجيا الخلية المستقلة للخلايا العضلية للقلب داخل القلب السليم والمرض. هناك العديد من الأسئلة التي يمكننا الإجابة عليها باستخدام خلايا عضلة القلب المعزولة.

مثل إمكانية التكاثر. هناك تغييرات في التعبير الجيني أو تعبيرات خلوية محددة عند استجابة الإصابة. لسوء الحظ ، لا تعيش خلايا عضلة القلب في الماوس بعد أسبوع واحد في ظروف الثقافة الطبيعية.

لذلك ، في هذا الفيديو ، نصف طريقة محسّنة لعزل خلايا عضلة القلب لدى الفئران البالغة ، وتثبيتها وزرعها لمدة تزيد عن 21 يومًا ، ومن الصعب في البداية إتقان هذه التقنية. ولكن مع الممارسة ، يمكن للمرء أن يحقق ما يقرب من 80 إلى 90 ٪ من الخلايا العضلية للقلب بعد العزل وكفاءة تعداء 100 ٪. ويمكن لمعظم خلايا عضلة القلب هذه في الظروف الصحيحة البقاء على قيد الحياة خلال العشرين يومًا الماضية.

قم بتنظيف وتعقيم أدواتك الجراحية عن طريق نقعها في 70٪ كحول لمدة 15 دقيقة ثم غسلها بعد ذلك بالماء المقطر المزدوج. بعد الماء ، اترك الأدوات في الهواء لتجف بعد ذلك ، ونظف جهاز الإسراف عن طريق تشغيل 70٪ كحول مرتين لمدة خمس دقائق لكل منهما. ستساعد زيادة معدل التدفق على تنظيف الأنبوب بعد شطف الكحول من أي كحول متبقي عن طريق تشغيل الماء المقطر المزدوج لمدة 10 دقائق.

إعداد ثلاثة أطباق لتنظيف القلب بعد الختان. املأ كل طبق بـ 20 مل من المخزن المؤقت للخلية العضلية. أضف قطرتين إلى ثلاث قطرات من الهيبارين إلى كل طبق باستخدام ماصة باستور واخلط جيدًا عن طريق الماصات لأعلى ولأسفل عدة مرات.

خذ حقنة 10 ملليلتر واملأها بمخزن الخلية العضلية. قم بإزالة أي من فقاعات الهواء من المحقنة وضعها في الطبق الثالث بزاوية ، وثبتها بشريط لاصق. تحضير عقدة فضفاضة مع خياطة جراحية ووضعها حول الإبرة.

حقن الماوس مع الهيبارين عن طريق الحقن IP 20 دقيقة قبل التخدير. قم بتدوير المخزن المؤقت للخلية العضلية من خلال جهاز الإسراف بمعدل تدفق يبلغ ثلاثة مليلتر في الدقيقة. بعد خمس دقائق ، استبدل محلول الإسراف بمحلول إنزيم ، اشبع محلول الإنزيم بالأكسجين أثناء العملية ، مرة أخرى ، اضبط محلول الإنزيم على معدل تدفق يبلغ ثلاثة ملل في الدقيقة.

تأكيد التخدير بقرص إصبع القدم ووضع الماوس على منصة الجراحة. تعقيم الجلد بنسبة 70٪ كحول. افتح الصدر بحرص ، ومرن القلب ، وضع القلب في الطبق الأول.

تخلص من الدم من القلب عن طريق الضغط اللطيف ، ثم انقل القلب إلى الطبق الثاني لتنظيف الدم من القلب ولإزالة أي أنسجة غير قلبية. بعد ذلك ينقل القلب إلى الطبق الثالث. ابحث عن الشريان الأورطي واستخدم الملقط لإبقائه أكثر في وضع بيتون حول إبرة التعليب.

قم بتثبيته عن طريق شد العقدة المشدودة مسبقًا ثم عمل عقدة ثانية. لمزيد من الثبات ، قم بإصلاح الترتيب ووضعه بمساعدة مقطع. قم بقص أي خيط خياطة زائد ، ثم ابدأ أخيرًا في إفراز القلب باستخدام المخزن المؤقت للخلية العضلية في المحقنة لتنظيف أي دم متبقي في القلب.

قم بإزالة إبرة الحساب بعناية من المحقنة وربطها بجهاز الإسراف. حاول منع دخول أي فقاعات هواء إلى القلب. حيث أن هذا قد يؤثر على تدفق محلول الإنزيم وهضمه.

حرك الغلاف المائي لأعلى لتوفير بيئة متجانسة للقلب أثناء الإسراف. اسمح لمحلول الإنزيم بالتدفق عبر القلب بسرعة 2 إلى 3 ملل في الدقيقة. دع محلول الإنزيم يتدفق عبر القلب لمدة دقيقتين.

في دقيقتين ، امزج 40 ميكرولتر من مائة ميكرومولار من محلول كلوريد الكالسيوم في محلول الإنزيم. دع محلول الإنزيم يمر عبر القلب لمدة 10 إلى 15 دقيقة أخرى. بمجرد أن يصبح التدفق سلسًا ويبدأ القلب في الظهور باللون البني واللين ، فأنت تعلم أن لديك توزيعًا متساويًا لإنزيم الكولاجيناز لتحقيق الهضم السليم للقلب.

عندما تعتقد أن عملية الهضم قد اكتملت ، انزل القلب من نظام نضح لانجندورف وضعه في طبق بتري مقاس 16 ملم مملوء بخمسة مليمترات من محلول الإنزيم وانقله إلى قدم السلامة الحيوية. قم بإزالة الأذينين والأنسجة الدهنية الزائدة بحذر. افرم القلب في قطع محددة بمساعدة الملقط.

خذ ماصة باستور معقمة واقطع طرفها عند 45 درجة. استخدم ماصة باستور لتفتيت أنسجة القلب عن طريق الماصات اللطيفة لأعلى ولأسفل. يوفر الهضم الأمثل تعليقًا لخلايا عضلة القلب أحادية الخلية بعد ذلك إضافة خمسة مليلتر من محلول التوقف لإيقاف نشاط الإنزيم لتجنب الإفراط في الهضم ، خذ أول أنبوب مخروطي بحجم 50 مليلترًا وضع مصفاة خلية معقم مائة ميكرون عليه.

تمرير تعليق عضلة القلب من خلال مصفاة الخلية لإزالة أي قطع كبيرة من الأنسجة. أخيرًا اغسل المصفاة بمحلول توقف لجمع أي بقايا من خلايا عضلة القلب المرفقة. الطرد المركزي تعليق الخلية في 20 GS لمدة ثلاث دقائق وتجاهل المادة طافية.

أعد تعليق خلايا عضلة القلب و 10 مل من محلول التوقف ، على فترات ثلاث دقائق عند 10 ميكرولتر من 100 ملي مولار من محلول كلوريد الكالسيوم أربع مرات ويخلط. بعد الإصدار الرابع من أجهزة الطرد المركزي ، تم تعليق خلايا عضلة القلب عند 20 GS لمدة ثلاث دقائق وتجاهل المادة الطافية. أعد تعليق خلايا عضلة القلب في وسائط الاستنبات قبل وضع الخلايا في طبق 60 ملم ووضعها في حاضنة ثاني أكسيد الكربون لمدة ساعتين إلى ثلاث ساعات.

في غضون ساعتين إلى ثلاث ساعات. سيتم الالتزام بأنواع الخلايا الملوثة الرئيسية مثل انفجارات الألياف لخدمة الطبق ، مما يسمح بعزل نقي لخلايا عضلة القلب. بعد ذلك ، أخرج الطبق من الحاضنة واجمع الخلايا العضلية العائمة في أنبوب مخروطي وأعد تشغيل خلايا عضلة القلب في صفيحة مغطاة بالرقائق 24 بئر.

أربع إلى ست ساعات كافية لتلتصق خلايا عضلة القلب بالسطح. لذلك يمكن إجراء تعداء في ست ساعات بعد الطلاء. تم استخدام كاشف تعداء RNA IMAX لزرع الخلايا العضلية القلبية باستخدام siRNAs.

تحتوي وسائط الاستنبات على 25 ميكرو مولار ستاتين دموي مكمل بـ 10٪ FBS ، والذي وجدنا أنه أكثر ملاءمة لإجراء زراعة خلايا عضلة القلب على المدى الطويل والحث على تحليل الانتشار. بعد ترنسفكأيشن ، يمكنك عرض خلايا عضلة القلب عن طريق الفحص المجهري باستخدام حاضنة دقيقة لمعرفة كيف الخلايا للتصوير الفاصل الزمني. هذه صور حقل مشرق لخلايا عضلة القلب المنقولة على شكل قضيب عند التكبير المنخفض والعالي.

هنا ، يمكنك رؤية التصوير يومًا بعد يوم ، والذي يعرض التغييرات في مورفولوجيا عضلة القلب لدى الفئران البالغة. نحن نؤكد أن خلايا عضلة القلب تتمتع بصحة جيدة وقابلة للتقلص في النقاط الزمنية المبكرة ، وكذلك بعد التمايز D والثقافة طويلة الأمد. فيما يلي مثال على تلطيخ الفلورسنت المناعي Ki67 الذي يوضح التكاثر الناجم عن خلايا عضلة القلب البالغة في الثقافة بعد siRNAs ، وهي تعداء.

كما ترون من النتائج باستخدام هذه التقنية ، يمكن للمرء الحصول على خلايا عضلة القلب السليمة للبالغين من الفئران والجرذان وزرعها لدراستها على المدى الطويل. في الختام ، بمجرد إتقان هذه التقنية سيسمح لنا بدراسة خلايا عضلة القلب بشكل جيد خارج بروتوكولات الاستزراع الحالية.


عزل الخلايا الكيراتينية الموجودة في البشرة في الفئران وزرعها المستنسخة في المختبر

الهدف من هذا البروتوكول هو عزل الخلايا القرنية الموجودة في البشرة من الجلد الظهري للفئران البالغة لمجموعة متنوعة من تطبيقات المصب مثل البيولوجيا الجزيئية والكيمياء الحيوية وفرز الخلايا المنشطة الفلورية والاستخدامات الأولية في المختبر (على سبيل المثال ، الخلايا الكيراتينية المستنسخة).

الملخص

البروتوكول الموصوف هنا هو طريقة موثوقة لحصاد الخلايا الكيراتينية الأولية من إناث الفئران البالغة (54 & # 177 2 يومًا) ينتج عنها حوالي 30 × 10 6 خلايا قابلة للحياة لكل فأر. يتم حصاد الخلايا الكيراتينية الأولية للفأر البالغ من الجلد الظهري لإناث الفئران. ذكر الفئران (

6 أسابيع) يمكن استخدامها لحصاد الخلايا الكيراتينية حسب متطلبات التجربة. يتم حلق الفئران التي تم التخلص منها وتعقيمها بغسل متسلسل في محاليل بوفيدون اليود والإيثانول (70٪ كحول). بعد تطهير الفئران ، تتم إزالة الجلد الظهري وإزالة الدهون والعضلات تحت الجلد بمشرط والتخلص منها. يتم تقطيع الجلد إلى قطع صغيرة ومعالجته باستخدام مادة التربسين المعتدلة والمنخفضة درجة الحرارة لفصل الأدمة السفلية عن البشرة. يتم تقليب القشرة المكسورة بسرعة منخفضة ، وتصفيتها لإزالة الشعر ، وعدها ، وإعادة تعليقها في وسط المزرعة. توفر هذه الطريقة تعليقًا ممتازًا لخلية مفردة للخلايا عالية الاستزراع للعديد من التطبيقات النهائية.

مقدمة

يغطي جلد الثدييات الجسم بالكامل ويؤدي العديد من الوظائف (على سبيل المثال ، حاجز مادي أساسي وتنظيم درجة الحرارة والاحتفاظ بالرطوبة). على مدى العقود الخمسة الماضية ، أسفرت الأبحاث الأساسية التي أجريت على جلد الفأر عن معلومات جديدة عن بنية ووظيفة الجلد. ساعد نموذج جلد الفأر بشكل كبير في فهم البيولوجيا الأساسية الكامنة وراء الآليات الجزيئية المعقدة للتسرطن الناتج عن الإشعاع الكيميائي أو فوق البنفسجي. قدمت نماذج جلد الفأر هذه مساهمة كبيرة في فهم أمراض الجلد البشرية والتخفيف من حدتها. لاستكشاف مزيد من التشريح الجزيئي للخلايا الكيراتينية الأولية في بيولوجيا نمو بصيلات الشعر ، وأبحاث الخلايا الجذعية ، والتسرطن ، والاستكشاف الجيني للبشرة ، فمن المستحسن في كثير من الأحيان عزل الخلايا القرنية الظهارية الأولية وزرعها من جلد الفئران لاستخدامها بالتوازي مع التجارب في الجسم الحي. كان العامل المحفز في تطوير هذه الطريقة هو الحاجة إلى اختبار في المختبر للخلايا الجذعية للبشرة وبصيلات الشعر المستنسخة 1 ، 2. كانت هناك أيضًا حاجة ملحة إلى معلقات خلية مفردة لخلايا البشرة المناسبة للمقايسات المستنسخة 3 ، وفرز الخلايا المنشطة الفلورية ، وقياس التدفق الخلوي 3 ، 4. تتمثل مزايا هذه الطريقة في زيادة الحصاد القوي بترتيب من حيث الحجم مقارنة بالطرق الأخرى 5 ، 6 ، وإدراج الجزء الظهاري من بصيلات الشعر ، والقدرة العالية على زراعة الخلايا المحصودة. في الثمانينيات ، لم تكن هناك طرق معروفة يمكنها تلبية هذه المتطلبات. في السنوات اللاحقة ، تم تنقيح هذه الطريقة لزيادة إنتاجية الخلايا. يتمثل القيد الرئيسي لهذه الطريقة في إخفاء بعض الأجسام المضادة الحساسة للتربسين والتي من شأنها التأثير على نشاط المناعة 6.

تلقت الفئران التربية وفقًا للإرشادات المحددة الخالية من مسببات الأمراض. تم الحصول على واحدة إلى خمس فئران إناث تتراوح أعمارهن بين 54 و 177 يومين. في الفئران الأكبر سنًا ، ستنخفض قابلية الخلايا الكيراتينية للحياة بسبب طور التنامي (النمو) لدورة الشعر. أيضا ، فإن عملية التربسين أكثر صعوبة مقارنة بالفئران الصغيرة. تم تحسين إجراء الحصاد بنجاح للجلد الرقيق لإناث الفئران مقارنة بالذكور. لا تُستخدم الفئران الذكور عمومًا في حصاد الخلايا الكيراتينية لأنها تميل إلى القتال مع بعضها البعض أثناء السكن ، وبالتالي قد تترك خدوشًا أو جروحًا على الجلد.

بروتوكول

تمت الموافقة على جميع بروتوكولات استخدام الحيوانات الفقارية من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية بجامعة مينيسوتا وفقًا للمبادئ التوجيهية الحكومية والمعاهد الوطنية للصحة الموصى بها.

1. تهيئة طبقة التغذية والثقافة الفرعية

  1. قم بإذابة قارورة خلية واحدة تحتوي على الماوس السويسري المجمد 3T3 من خزان النيتروجين السائل عن طريق وضع القارورة في حمام مائي 37 & # 176 درجة مئوية لمدة 1-2 دقيقة. يبلغ عدد الخلايا الموجودة في القارورة حوالي 1 × 10 6.
  2. قم بإزالة قنينة الخلية 3T3 عندما تذوب الشظية الأخيرة من الجليد. امسح الأنبوب بمسحة كحول 70٪. ثم انقل القارورة إلى خزانة السلامة الأحيائية.
  3. نقل الخلايا ببطء إلى قارورة T-150 ، وشطف قارورة 3T3 مع 1 مل من وسط CGM. أضف ببطء 30 مل من متوسط ​​النمو الكامل 3T3 الذي تم تسخينه مسبقًا (CGM) إلى الخلايا. صخرة القارورة برفق لنشر الخلايا الليفية 3T3 بالتساوي. قم بتسمية القارورة بتفاصيل خط الخلية والتاريخ ورقم المرور بشكل مناسب.
  4. احتضان الخلايا في 37 & # 176C مع 5٪ CO2 و 95٪ رطوبة.
    ملاحظة: وفقًا لـ ATCC ، فإن الوقت المضاعف للماوس السويسري 3T3 هو 18 ساعة عند التقاء (منع التلامس) ، وتبلغ الكثافة حوالي 40000 خلية لكل سم 2. نستخدم سطرًا معينًا من 3T3 خلال 10-15 مقطعًا بعد التهيئة. يمكن أن يحدث نمو أسرع أو وجود خلايا على شكل مغزل في الممرات العليا وعادة ما يكون علامة على أن 3T3 لن تؤدي وظيفتها مثل الخلايا المغذية للخلايا الكيراتينية في الفئران البالغة. في حالة حدوث نمو سريع ، فمن الأفضل بدء خط جديد من خلايا المرور السفلي.
  5. قم بتغيير الوسائط بعد 24 ساعة لإزالة الخلايا الميتة وما تبقى من DMSO (عامل الحفظ بالتبريد) ، ومرتين أسبوعيًا بعد ذلك.السماح للخلايا بالتكاثر حول التقاء 80٪ واستخدام قوارير T-150 لبدء الثقافة. استخدم قوارير T-225 للثقافة الفرعية بعد التهيئة.
  6. لثقافة الخلايا الليفية 3T3 الفرعية ، قم بإزالة القارورة من حاضنة ثقافة الخلية واغسل مرتين باستخدام برنامج تلفزيوني بارد معقم (1x) مع جنتامايسين. Pipet 10 مل من محلول التربسين (37 & # 176 درجة مئوية) قبل التسخين (0.25٪) في كل دورق T-225.
    1. ضع القارورة على طبق تدفئة لمدة 3-8 دقائق. قم بإزالة القارورة واستخدم راحة اليد بلطف للاستفادة من جدران القارورة لفصل الخلايا وتأكيد انفصال الخلية تحت المجهر المقلوب. قد يبدو محلول التربسين غائما مع وجود خلايا 3T3 منفصلة.

    2. تحضير طبقة التغذية 3T3 للإشعاع بالأشعة السينية والبذر

      تحضير 3T3 الخلايا قبل أسبوع واحد من تشعيعها والسماح لها بالنمو

    1. امص حوالي 2 & # 82113 مل من محلول طلاء الكولاجين في أطباق بتري 60 مم لتغطية السطح السفلي وإزالة سائل طلاء الكولاجين الزائد (انظر الجدول 1). نقل أطباق بتري إلى حاضنة 37 & # 176 درجة مئوية مع 5٪ CO2 لمدة لا تقل عن 1 ساعة. لا تدع الأطباق تجف في الحاضنة.

    3. حصاد الخلايا الكيراتينية الأولية والبذر

    1. قتل أربعة إلى خمسة فئران بالغة عبر ثاني أكسيد الكربون2 الاستنشاق وفقًا لمعايير منشأة الحيوانات المعتمدة / IACUC. ومع ذلك ، يمكن أيضًا استخدام هذا البروتوكول للفئران من الإناث / الذكور.
      1. قص ما يقرب من 9 سم 2 من الفراء الظهري بمقص كهربائي للحيوانات وضع جميع الفئران المقصوصة في وعاء سعة 500 مل مع ما يكفي من محلول بوفيدون اليود المطهر (وليس الفرك) لتغطيتها لمدة 1 & # 82112 دقيقة. قم برج الجرة جيدًا لتغليف المحلول المطهر بالتساوي على الفئران.
      2. اسكب المحلول واشطفه بالماء النظيف حتى يصبح السائل صافيًا. كرر نفس الغسل المطهر متبوعًا بشطف الماء. بعد الغسيل المطهر بمحلول اليود ، نقع جميع الفئران في 70٪ من الإيثانول لمدة 5 & # 821110 دقيقة.
        ملاحظة: ستحتفظ الفئران ذات الفراء الخفيف (على سبيل المثال ، BALB / c) بلون مصفر طفيف من غسل اليود المطهر ، بينما لن تحافظ الفئران ذات اللون الداكن (على سبيل المثال ، C57BL / 6). والجدير بالذكر أن بقاء الخلية أو نمو الثقافة لا يتأثران بسبب اللون الأصفر.
      1. احتفظ بالجلد المقشط في محلول PBS حتى تتم معالجة جميع أنواع الجلود المتبقية. باستخدام مشرط ، قم بتقطيع القشرة إلى شرائح مقاس 0.5 سم × 1 & # 82111.5 سم وضع الجانب المشعر لأعلى في طبق بتري معقم.
      1. خلال فترة الحضانة هذه لمدة ساعتين ، قم بتغطية الأطباق بطلاء الكولاجين ووضعها في 37 & # 176 درجة مئوية لمدة 1 ساعة (انظر الخطوة 3.1.2). بالنسبة للمقايسات المستنسخة ، تم بالفعل طلاء أطباق بتري 60 مم قبل 24 ساعة من حصاد الخلايا الكيراتينية للسماح لطبقة التغذية 3T3 المشععة بالالتصاق بالقاع والانتشار بالتساوي.
        ملاحظة: يعد طلاء أطباق الاستزراع للثقافة المستنسخة أمرًا مهمًا جدًا للارتباط المناسب ، وتشكيل المستعمرات ، والنمو النهائي / تكاثر الخلايا الكيراتينية الموجودة في البشرة.
      1. لا تستخدم القوة المفرطة ، ولكن استخدم القوة الكافية لكشط البشرة ، وإلا ستؤثر على حيوية الخلية.
      2. أثناء كشط البشرة ، حافظ على الشفرة عمودية على قطعة الجلد. إذا كانت الشفرة مائلة باتجاه حركة الشفرة ، فهناك فرص أكبر لتمزق الجلد. إذا كانت الشفرة مائلة بزاوية بعيدًا عن حركة الشفرة ، فهناك فرص أكبر في إزالة البشرة بشكل غير كافٍ.
      1. خذ الجرة داخل غطاء السلامة الأحيائية. قم بإزالة شريط التحريك وصب المحتويات في مرشح مصفاة متصل بأنبوب مخروطي سعة 50 مل. قم بتصفية الشعر غير المرغوب فيه وأوراق الطبقة القرنية.
      2. اضغط على الشعر مع مواد الطبقة القرنية داخل المصفاة وقم بمعالجتها لتحرير خلايا الشعر المحتبسة. استخدم 5 مل من وسط الحصاد للسماح للخلايا المحاصرة المتبقية بالإفراج عن وتدفق الأنبوب. اجعل الحجم الكلي يصل إلى 50 مل في أنبوب مخروطي.
      1. في هذه الخطوة ، احتفظ بالخلايا في صندوق ثلج لتجنب أي تجمع. إضافة 25 مل من وسط الحصاد والسحن مرة أخرى (20 & # 821125x).
      2. لضمان حساب دقيق للخلايا الكيراتينية في هذه الخطوة ، خذ 1 مل من تعليق الخلية وأضف 19 مل من وسط الحصاد. الآن تمييع الخلية هو 1:20 في أنبوب مخروطي سعة 50 مل. إذا تم حصاد الخلايا الكيراتينية من ماوس واحد ، فاضبط حجم تعليق الخلية. بدلاً من 30 مل ، استخدم 15 مل وقم بعمل تخفيف بنسبة 1:10 لحساب الخلايا.
      1. سجل جميع الخلايا الزرقاء الداكنة إيجابية بالنسبة لأزرق التريبان كخلايا ميتة غير قابلة للحياة ، وسجل خلايا ذهبية وردية صغيرة كخلايا قابلة للحياة. يجب أن يكون العائد النهائي للخلايا الكيراتينية لكل فأر حوالي 30 مليون خلية قابلة للحياة.
      1. للثقافة الجماعية ، قم ببذر 2 إلى 4 ملايين خلية ذهبية قابلة للحياة في كل طبق بتري 35 مم في وسط زراعة الخلية (وسط من نوع KGM + مكملات للثقافات أحادية الطبقة) (انظر الجدول 1). لفحص استنساخ (تكوين مستعمرة) ، قم بزرع 1000 خلية لكل طبق بتري 60 مم على طبقات مغذية 3T3 من الفأر السويسري المشع بالأشعة السينية مع طلاء الكولاجين ووسيط William & # 8217s E المعدل مع المكملات والمصل.
      2. استخدم ما مجموعه 2 إلى 4 مل وسط لأطباق بتري 35 مم و 60 مم ، على التوالي. أيضًا ، قم بصياغة وسيط DMEM و Williams E الذي تم شراؤه من ATCC بمستويات منخفضة من بيكربونات الصوديوم للاستخدام عند 5٪ من ثاني أكسيد الكربون2.
      1. اشطف الأطباق بالماء البارد المعقم حتى تصبح الأطباق نظيفة. ضع الأطباق مائلة على غطاء الأطباق واتركها تجف لحساب المستعمرة النهائية. بشكل ملحوظ ، عند إجراء مقايسة الثقافة المستنسخة ، لا ماصة أبدًا & # 601 مل من الخلايا. إذا كانت الخلايا مركزة ، قم بتخفيف تركيز الخلية بشكل متسلسل.

      نتائج الممثل

      عادة ، يتم الحصول على إنتاجية الخلايا الكيراتينية في البشرة لكل فأر تتراوح من 20 × 10 6 إلى 30 × 10 6 أزرق تريبان باستثناء الخلايا 8 ، 9. تتراوح الصلاحية من 80٪ إلى 90٪. تبلغ كفاءات البذر النموذجية حوالي 30٪ من الارتباط في 24 ساعة. يبلغ تكوين المستعمرة على طبقات التغذية 3T3 المشععة حوالي 60 مستعمرة لكل 1000 خلية قابلة للحياة تم زرعها لفئران C57BL / 6 ، وحوالي 30 مستعمرة لكل 1000 خلية للفئران من النوع السويسري 10 ، 11. النتائج النموذجية من فحوصات تكوين المستعمرات موضحة في شكل 1. عدد الخلايا الجذعية لبصيلات الشعر حوالي 9٪ CD34 + / CD49f + الخلايا الجذعية للفئران C57BL / 6 الفئران 12. النتائج النموذجية من التدفق الخلوي ترد في الشكل 2.

      يتم توضيح خصائص النمو لأربع وسائط مختلفة في الشكل 3. تشتمل الوسائط التي تم اختبارها على وسيط KGM-gold و SFM و William & # 39s E و Morris-2 (وسيط منخفض الكالسيوم تم تطويره في مختبر Morris استنادًا إلى Williams E).


      الشكل 1: أمثلة تمثيلية من مقايسة الخلايا الكيراتينية المستنسخة من الفئران البالغة. توضح هذه الصورة تكوين مستعمرة الخلايا الكيراتينية من الفئران الأنثوية CD-1 التي تبلغ من العمر 54 يومًا والتي عولجت موضعيًا مع 1) بدون علاج ، 2) الأسيتون متبوعًا بعد أسبوع واحد بالأسيتون مرتين أسبوعياً لمدة أسبوعين ، 3) DMBA متبوعًا بأسبوع واحد بواسطة الأسيتون مرتين أسبوعياً لمدة أسبوعين ، 4) الأسيتون تبعه بعد أسبوع واحد من قبل TPA مرتين أسبوعياً لمدة أسبوعين ، و 5) DMBA تبعه بعد أسبوع واحد بواسطة TPA مرتين أسبوعياً لمدة أسبوعين. بعد علاجاتهم في الجسم الحي ، تم حصاد الخلايا الكيراتينية وبذرها عند 1000 خلية لكل طبق على طبقات مغذية من 3T3 المشععة ، وزرعها لمدة أسبوعين ، وبعد ذلك تم تثبيت الأطباق بالفورمالين المخزن وتلطيخها بالرودامين ب. يتكرر من كل مجموعة معالجة الفئران. لاحظ أن عدد المستعمرات الأكبر زاد عند العلاج بـ DMBA ، وأن العدد الإجمالي للمستعمرات زاد من معالجة TPA للفئران قبل حصاد الخلايا الكيراتينية. الاختصارات: DMBA: 7،12-dimethylbenz [a] anthracene TPA: 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.


      الشكل 2: مثال تمثيلي لقياس التدفق الخلوي للخلايا الجذعية لبصيلات الشعر من الفئران البالغة. باختصار ، تم عزل الخلايا الكيراتينية الأولية المعزولة من جلد الفئران الظهرية وتصفيتها للحطام الخلوي باستخدام مرشح الخلية. تم تمييز تعليق الخلايا الكيراتينية المعزولة بأجسام مضادة CD49f أو & # 9456-intel (PE) و CD34 (FITC) جنبًا إلى جنب مع صبغة حية ميتة وعناصر تحكم أخرى. تم استخدام الأجسام المضادة للتحكم في النمط المتماثل FITC و PE (الفئران IgG2akappa) لغرض التعويض (انظر جدول المواد). تم اختيار الخلايا الجذعية عن طريق CD49f (قناة PE) ، والتي تعرفت على المكون الخارجي لنصيب ديسموسومات الموجودة في خلايا البشرة القاعدية وبصيلات الشعر ، و CD34 (قناة FITC) ، التي تعرفت على الخلايا الجذعية لبصيلات الشعر (أي CD34). -FITC + و a6-PE + (العمود الأيمن العلوي ، إجمالي 5٪)). يُظهر العمود الأيمن مجموعات الخلايا الكيراتينية المختلفة ، وهي CD34-FITC فقط ، و CD34-FITC و a6-PE (عدد الخلايا الجذعية الموجبة المزدوجة) ، و a6-PE فقط ، والخلايا غير المصبوغة. لاحظ أن هناك مجموعتين من الخلايا الجذعية CD34 + كما تم الإبلاغ عنها 6 ، 14. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.


      الشكل 3: مقارنة بين أربع وسائط مختلفة على الثقافات الأولية لخلايا البشرة من إناث فئران بالغة. تم عزل الخلايا الكيراتينية الأولية من جلد الفئران الظهرية وتم عدها للبذر باستخدام أربع وسائط مختلفة (KGM و SFM و Willem & # 39s-E و Morris-2). تم بذر أعداد متساوية من الخلايا الكيراتينية واتباعها لتشكلها العام ونمط نموها. لاحظ أن الخلايا الكيراتينية المتكاثرة لها أشكال مختلفة قليلاً. KGM ، و SFM ، و Morris-2 ، وكلها وسائل الكالسيوم المختزلة لديها أقوى نمو بعد أربعة عشر يومًا. في المقابل ، لا تستمر الخلايا عند زراعتها في وسط ويليامز إي الذي يحتوي على 1.4 ملي مولار من الكالسيوم ونسبة عالية من البوتاسيوم إلى الصوديوم. من المثير للدهشة أن وسيط ويليامز إي الذي يحتوي على مكملات وعشرين بالمائة من مصل الأبقار الجنيني يدعم ثقافات استنساخ الخلايا الكيراتينية بشكل أفضل بكثير من أي وسيط آخر تم اختباره ، ربما لأن وسيط ويليامز إي المخصب يساعد الخلايا المغذية 3T3 على & # 34 تغذية & # 34 بشكل أفضل. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

      الحلول والوسائط تعليقات
      حلول الحصاد
      2.5٪ التربسين (5 مل)
      Dulbecco & # 8217s PBS (500 مل)
      جنتاميسين (2 مل)
      برنامج تلفزيوني مع 2x جنتامايسين (45 مل)
      محلول ملحي مخزّن بالفوسفات (PBS) مع 2x جنتامايسين
      محلول التربسين
      حلول ثقافة الخلية
      محلول طلاء الأطباق Purecol-Fibronectin:
      1 م حبيس (1 مل)
      116 ملي كلوريد الكالسيوم (1 مل)
      ألبومين مصل الأبقار 1.0 مجم / مل (10 مل)
      وسط ثقافة الخلية (100 مل)
      فيبرونكتين (1 مجم)
      كولاجين Purecol (1 مل)
      محلول تجميد الخلية
      DMSO (2 مل)
      DMEM مع 10٪ BCS و Pen-strep
      متوسطة الحصاد يجب أن تكون خالية من الكالسيوم
      2x جنتاميسين (1 مل)
      FBS (50 مل)
      SMEM (500 مل)
      وسائط ويليامز عالية الكالسيوم & # 39 E مع:
      EGF (5 & # 181g / mL) 1 مل
      جلوتامين 14.5 مل
      هيدروكورتيزون (1 مجم / مل) 0.5 مل
      الأنسولين 1 مل
      LinoAcid-BSA (0.1 مجم / مل) 0.5 مل
      MEM Ess AminoAcids 4 مل
      فيتامينات MEM 5 مل
      البنسلين-الستربتومايسين 5 مل
      ترانسفرين (5 مجم / مل) 1 مل
      فيتامين أ (1 مجم / 1،000 & # 181 لتر) 57.5 & # 181 لتر
      فيتامين هـ 1 مجم / مل (4 & # 176 درجة مئوية) & # 160 3.5 & # 181 لتر
      فيتامين د 2 (10 مجم / مل) 50 & # 181 لتر
      وسط النمو الكامل للأرومة الليفية 3T3 (CGM)
      BCS (100 مل)
      دميم (900 مل)
      البنسلين-الستربتومايسين (10 مل)
      KGM الوسيط المستخدم في الثقافة الجماعية عبارة عن وسط منخفض من الكالسيوم
      Morris 2 Medium بنفس المكملات مثل Williams & # 39 E. نوع منخفض من الكالسيوم في Williams E مع المكملات الغذائية

      الجدول 1: وصفات الحل والوسائط.

      مناقشة

      تم تطوير طريقة حصاد الخلايا الكيراتينية الموصوفة هنا لإنتاج عوائد عالية من الخلايا الكيراتينية الأساسية عالية الاستزراع من الجزء الخلفي من إناث الفئران البالغة. هذه الخلايا الكيراتينية مناسبة لقياس التدفق الخلوي ، وتطبيق البيولوجيا الجزيئية ، وثقافة الخلايا الأولية ، بما في ذلك المقايسة المستنسخة المذكورة هنا. كانت طريقة حصاد الخلايا الكيراتينية هذه مفيدة أيضًا في دراسة الجوانب الأخرى في مجرى النهر من التسرطن الكيميائي الجلدي وتعزيز الورم 1 ، 13.

      هناك عدة خطوات حاسمة في البروتوكول. أولاً ، من أجل الدقة وقابلية التكاثر ، تم استخدام إناث الفئران البالغة من العمر 54 و 177 يومًا. وقد مكّننا ذلك من إجراء فحوصات مستعمرة حساسة وكمية من سلالات متعددة من الفئران واستخدامها كنمط ظاهري في تحليل الارتباط مما يؤدي إلى تحديد جين تنظيمي جديد واحد على الأقل للخلايا الجذعية 10 ، 11. ثانيًا ، من المفيد تقطيع القشرة إلى قطع أصغر ، لأن التريبسين أكثر فعالية من محاولة الحفاظ على الجلد كاملاً. ثالثًا ، يعد وقت ودرجة حرارة تعويم التربسين مهمين جدًا للثقافة اللاحقة. علاوة على ذلك ، يحتاج المرء إلى & # 34 وخز بشكل كبير & # 34 في الشعيرات المتبقية على الفلتر لإخراج الخلايا المرفقة. هذه الخطوة مهمة للحصول على عوائد عالية من الخلايا. علاوة على ذلك ، تعتبر درجة حرارة الحاضنة 32 & # 176 درجة مئوية مهمة لزراعة الخلايا الكيراتينية على المدى الطويل من الفئران البالغة. أخيرًا ، في هذا البروتوكول ، تستند القراءات المتوازية للتجارب في المختبر وفي الجسم الحي 1 إلى الثقافات الأولية بدلاً من الثقافات الفرعية أو خطوط الخلايا. والجدير بالذكر ، في حالة حصاد الخلايا الكيراتينية الأولية لأول مرة باستخدام هذا البروتوكول ، احتفظ بالأدمة المتبقية بعد الكشط لتأكيد الإزالة الكاملة لبصيلات الشعر جنبًا إلى جنب مع البشرة عن طريق الملاحظة النسيجية المرضية.

      تتمثل القوة الرئيسية لهذا البروتوكول في حصاد الخلايا الكيراتينية للماوس البالغ في أنه ينتج عوائد عالية من الخلايا القابلة للزراعة المناسبة للعديد من تطبيقات المصب. القيد الرئيسي هو أن بعض حواتم سطح الخلية قد تكون حساسة للتريبسين مثل أن المناعة المناعية قد تتعرض للخطر. لذلك ، عند اختبار جسم مضاد جديد على سطح الخلية ، قد يكون من الحكمة استخدام طريقة تعتمد على dispase 6 أو thermolysin 5 للحصاد للمقارنة. تكمن أهمية هذا البروتوكول في أنه قد تم اختباره بدقة وتحديد كميته وتطبيقه على تطبيقات متنوعة مثل فحوصات الخلايا الجذعية المستنسخة 1 ، 9 ، 10 ، 11 ، للثقافات الجماعية في الكيمياء الحيوية 8 ، لفرز نظام مراقبة الأصول الميدانية في تحليل الخلايا الجذعية 3 ، 4 ، للبيولوجيا الجزيئية 3 ، 12 ، ولتسلسل الحمض النووي الريبي المستمر والحمض النووي.


      كيف تهم الوحدة: الآليات

      نموذج الوحدة

      يفترض نموذجنا للوحدة [8 ، 9] أن العزلة الاجتماعية المتصورة تعادل الشعور بعدم الأمان ، وهذا يؤدي إلى زيادة اليقظة الضمنية لتهديد اجتماعي (إضافي) في البيئة. ينتج عن المراقبة اللاواعية للتهديد الاجتماعي تحيزات معرفية: بالنسبة للأشخاص غير الوحيدين ، يرى الأفراد الوحيدين العالم الاجتماعي كمكان أكثر تهديدًا ، ويتوقعون المزيد من التفاعلات الاجتماعية السلبية ، ويتذكرون المزيد من المعلومات الاجتماعية السلبية. تميل التوقعات الاجتماعية السلبية إلى استنباط سلوكيات من الآخرين تؤكد على الأشخاص الوحيدين وتوقعات # x02019 ، وبالتالي إطلاق نبوءة تحقق ذاتها حيث ينأى الأشخاص الوحيدون بأنفسهم بنشاط عن الشركاء الاجتماعيين المحتملين حتى لو كانوا يعتقدون أن السبب الاجتماعي تُنسب المسافة للآخرين وهي خارجة عن إرادتهم [37]. حلقة الوحدة التي تعزز الذات هذه مصحوبة بمشاعر العداء والتوتر والتشاؤم والقلق وتدني احترام الذات [8] وتمثل نزعة نزعة تنشط الآليات العصبية الحيوية والسلوكية التي تساهم في نتائج صحية ضارة.

      السلوكيات الصحية

      إحدى عواقب الوحدة واليقظة الضمنية للتهديد الاجتماعي هي ضعف القدرة على التنظيم الذاتي. تعد القدرة على تنظيم الأفكار والمشاعر والسلوك أمرًا بالغ الأهمية لتحقيق الأهداف الشخصية أو الامتثال للأعراف الاجتماعية. الشعور بالعزلة الاجتماعية يضعف القدرة على التنظيم الذاتي ، وهذه التأثيرات تلقائية لدرجة أنها تبدو خارج نطاق الوعي. في مهمة الاستماع المزدوجة ، على سبيل المثال ، يحضر الأفراد الذين يستخدمون اليد اليمنى بسرعة وتلقائيًا بشكل تفضيلي إلى الأذن اليمنى القوية مسبقًا. يمكن تعزيز وقت الاستجابة للمحفزات المقدمة للأذن غير المهيمنة ، على الرغم من ذلك ، من خلال توجيه المشاركين إلى الاهتمام بأذنهم اليسرى. من بين الشباب الذين تمت إدارتهم هذه المهمة ، لم تختلف المجموعات المنفردة وغير العادية في الأداء عند توجيهها للاهتمام بأذنها اليمنى القوية مسبقًا ، ولكن أداء المجموعة المنعزلة كان أسوأ بكثير من المجموعة غير اللطيفة عند توجيهها لتحويل الانتباه إلى غيرهم. - نفاذة الأذن اليسرى [30]. بعبارة أخرى ، قد تكون عمليات الانتباه التلقائية غير متضررة ، لكن عمليات الانتباه المجهدة تتعرض للخطر في حالة العزلة بالنسبة للأفراد المرتبطين اجتماعياً.

      من الأمور ذات الصلة بالصحة القدرة على التنظيم الذاتي في مجال سلوكيات نمط الحياة. يمكن أن يعزز تنظيم المشاعر القدرة على تنظيم سلوكيات ضبط النفس الأخرى [38] ، كما يتضح من الأبحاث التي تظهر أن التأثير الإيجابي يتنبأ بزيادة النشاط البدني [39]. في البالغين في منتصف العمر وكبار السن ، ارتبط الشعور بالوحدة مع بذل جهد أقل للحفاظ على المشاعر الإيجابية وتحسينها [31]. وأوضح التنظيم المخترق للعاطفة لدى الأفراد الوحيدين تضاؤل ​​احتمالية قيامهم بأي نشاط بدني ، كما تنبأت الوحدة أيضًا بانخفاض النشاط البدني بمرور الوقت [31]. يُعد النشاط البدني عاملًا معروفًا وقائيًا للصحة البدنية ، والصحة العقلية ، والوظائف المعرفية [40] ، مما يشير إلى أن ضعف التنظيم الذاتي قد يساهم في زيادة المخاطر الصحية المرتبطة بالوحدة من خلال تقليل احتمالية الانخراط في سلوكيات تعزز الصحة. تُظهر الأدبيات ذات الصلة أن الوحدة هي أيضًا عامل خطر للسمنة [41] والسلوك المضر بالصحة ، بما في ذلك الميل الأكبر لتعاطي الكحول [42]. إلى الحد الذي يفسر فيه التنظيم الذاتي السلوكيات الصحية السيئة لدى الأشخاص الوحيدين ، يمكن تحقيق السلوكيات الصحية الأفضل بسهولة أكبر في الشركة الفعلية أو المتصورة للآخرين. ومن المثير للاهتمام أن الأبحاث التي أجريت على الحيوانات أظهرت أن العزلة الاجتماعية تخفف من الآثار المفيدة للتمرين على تكوين الخلايا العصبية [43] ، مما يعني أن السلوكيات الصحية قد تخدم غرضها بشكل أفضل أو يكون لها تأثير أكبر بين أولئك الذين يشعرون بالارتباط الاجتماعي أكثر من أولئك الذين يشعرون بالوحدة. لا تزال هذه الفرضية قيد الاختبار ، لكن البحث عن الآثار التصالحية للنوم يتوافق مع هذه الفكرة.

      نايم

      لمواجهة الآثار الفسيولوجية لتحدي التجارب العاطفية والمعرفية والسلوكية اليومية ، يوفر النوم استعادة فسيولوجية. الحرمان التجريبي من النوم له آثار سلبية على وظائف القلب والأوعية الدموية ، والحالة الالتهابية ، وعوامل الخطر الأيضية [44]. بالإضافة إلى ذلك ، ارتبطت مدة النوم القصيرة بخطر الإصابة بارتفاع ضغط الدم [45] ، وتكلس الشريان التاجي [46] ، والوفيات [47].

      ما هو أقل تقديرًا هو أن جودة النوم قد تكون أيضًا مهمة في تحقيق التأثيرات التصالحية للنوم. يؤدي النوم غير المنعش (أي النوم غير المنعش على الرغم من مدة النوم العادية) إلى إعاقات أثناء النهار مثل التعب الجسدي والفكري ، وضعف الأدوار ، والمشاكل الإدراكية والذاكرة [48]. لقد لاحظنا أن الوحدة تزيد من مشاعر الضعف واليقظة اللاواعية للتهديد الاجتماعي ، والإدراك الضمني الذي يتعارض مع الاسترخاء والنوم السليم.في الواقع ، ارتبطت الوحدة والعلاقات الاجتماعية ذات الجودة الرديئة بنوعية النوم السيئة المبلغ عنها ذاتيًا والخلل الوظيفي أثناء النهار (أي انخفاض الطاقة والإرهاق) ، ولكن ليس مع مدة النوم [49 & # x0201352]. في البالغين ، كان الاختلال الوظيفي الأكبر أثناء النهار ، وهو علامة على ضعف جودة النوم ، مصحوبًا بمزيد من الاستيقاظ الصغير ليلاً ، وهو مؤشر موضوعي لاستمرارية النوم تم الحصول عليه من قبعات النوم التي يرتديها المشاركون خلال ليلة واحدة في المستشفى وسبع ليالٍ بمفردهم. سرير في المنزل [53]. إن اقتران الخلل الوظيفي أثناء النهار والاستيقاظ المجهري يتوافق مع دراسات تخطيط النوم التي تظهر اقترانًا ، بشكل أساسي التكافؤ ، بين نوعية النوم الذاتي واستمرارية النوم [54] ، ويدعم الفرضية القائلة بأن الوحدة تضعف نوعية النوم.

      في امتداد لهذه النتائج ، ارتبط الشعور بالوحدة بخلل وظيفي أكبر خلال النهار في دراسة يوميات لمدة 3 أيام للبالغين في منتصف العمر ، وهي رابطة كانت مستقلة عن العمر والجنس والعرق / العرق ودخل الأسرة والسلوكيات الصحية ومؤشر كتلة الجسم والمزمن. الظروف الصحية وشدة أعراض المرض اليومية وما يرتبط بها من مشاعر التوتر والعداء وسوء الدعم الاجتماعي وأعراض الاكتئاب. أشارت تحليلات الفريق المتداخل للأيام الثلاثة المتتالية إلى أدوار سببية متبادلة محتملة للوحدة والخلل الوظيفي أثناء النهار: توقعت مشاعر الوحدة اختلال وظيفي خلال النهار في اليوم التالي ، وكان للخلل أثناء النهار تأثير ضئيل ولكنه مهم على الشعور بالوحدة في اليوم التالي [55] ، تأثيرات التي كانت مستقلة عن مدة النوم. بعبارة أخرى ، نفس القدر من النوم يكون أقل صحة لدى الأفراد الذين يشعرون بمزيد من العزلة الاجتماعية ، ومن المفارقات أن النوم الأقل صحة يتغذى إلى الأمام ويزيد من تفاقم مشاعر العزلة الاجتماعية. تعمل هذه الحلقة العودية خارج الوعي وتتحدث عن عدم قابلية التدخل النسبية للوحدة.

      الأداء الفسيولوجي

      الارتباط بين الوحدة وأمراض القلب والأوعية الدموية والوفيات [13 ، 14 ، 19] قد يكون له جذوره في التغيرات الفسيولوجية التي تبدأ في وقت مبكر من الحياة. كما لوحظ سابقًا ، فإن العزلة الاجتماعية المزمنة ، والرفض ، و / أو الشعور بالوحدة في مرحلة الطفولة المبكرة ، والمراهقة ، وصغار البلوغ تتراكم في جرعة وأسلوب استجابة # x02013 للتنبؤ بعوامل الخطر الصحية للقلب والأوعية الدموية في مرحلة الشباب (26 عامًا) ، بما في ذلك الدم المرتفع الضغط [12]. في دراستنا للشباب ، ارتبط الشعور بالوحدة بمستويات مرتفعة من المقاومة المحيطية الكلية (TPR [49 ، 56]). يعتبر TPR هو المحدد الأساسي لـ SBP حتى سن 50 عامًا على الأقل [57] ، مما يشير إلى أن الارتفاعات المرتبطة بالوحدة في TPR في بداية مرحلة البلوغ إلى منتصفها قد تؤدي إلى ارتفاع ضغط الدم في منتصف العمر وكبار السن. تمشيا مع هذه الفرضية ، ارتبط الشعور بالوحدة بارتفاع ضغط الدم النفسي في عينة ملائمة لكبار السن [49] ، وفي عينة سكانية مكونة من 50 & # x0201368 بالغين بعمر 50 & # x0201368 في دراسة شيكاغو للصحة والشيخوخة والعلاقات الاجتماعية [21] . تم المبالغة في الارتباط بين الشعور بالوحدة وارتفاع ضغط الدم لدى الأطفال الأكبر سنًا مقارنةً بالبالغين الأصغر سنًا في هذه العينة [21] ، مما يشير إلى انخفاض فسيولوجي متسارع في الأشخاص الوحيدين مقارنةً بالأفراد غير الطبيعيين. دعمت دراستنا الحديثة للوحدة و SBP في نفس هؤلاء الأفراد على مدى خمسة تقييمات سنوية هذه الفرضية. لم تكن التقلبات قصيرة المدى (أي ، سنة واحدة) في الشعور بالوحدة تنبئًا مهمًا بتغيرات SBP على فترات مدتها سنة واحدة ، ولكن عنصرًا شبيهًا بالسمات للوحدة موجود في بداية الدراسة ساهم في زيادة أكبر في SBP على مدى 2 ، 3 ، وفترات 4 سنوات [22]. كانت هذه الزيادات تراكمية بحيث ارتبطت المستويات الأولية الأعلى من الوحدة بزيادات أكبر في SBP على مدى فترة 4 سنوات. كان التأثير المحتمل للوحدة على SBP مستقلاً عن العمر والجنس والعرق / العرق وعوامل الخطر القلبية الوعائية والأدوية والظروف الصحية وتأثيرات أعراض الاكتئاب والدعم الاجتماعي والإجهاد المتصور والعداء [22]. يعتبر ارتفاع ضغط الدم الشديد عامل خطر معروف لأمراض القلب والأوعية الدموية المزمنة ، وتشير هذه البيانات إلى أن آثار الوحدة تتراكم لتسريع الحركة على طول المسار نحو عواقب صحية خطيرة [20].

      المحددات الفسيولوجية المسؤولة عن التأثير التراكمي للوحدة على ضغط الدم لم يتم توضيحها بعد. تلعب TPR دورًا مهمًا في تحديد SBP في وقت مبكر إلى منتصف مرحلة البلوغ ، ولكن هناك آليات أخرى تلعب دورًا مع تقدم العمر. تتضمن آليات المرشح التغيرات المرتبطة بالعمر في فسيولوجيا الأوعية الدموية ، بما في ذلك زيادة تصلب الشرايين [58] ، وتناقص إطلاق الخلايا البطانية لأكسيد النيتريك ، واستجابة الأوعية الدموية المعززة لعوامل انقباض البطانية ، وزيادة في تعميم الكاتيكولامينات ، واستجابات موسعات الأوعية المخففة لتداول الأدرينالين بسبب انخفاض حساسية بيتا الأدرينالية في العضلات الملساء الوعائية [59 & # x0201361]. في المقابل ، تتأثر العديد من هذه الآليات بعوامل نمط الحياة مثل النظام الغذائي وقلة النشاط البدني والسمنة والعوامل التي تغير نسبة الدهون في الدم والعمليات الالتهابية التي لها عواقب معروفة على صحة الأوعية الدموية وعملها [62 ، 63].

      تأثيرات الغدد الصماء العصبية

      التغييرات في مستويات TPR نفسها تتأثر بمجموعة متنوعة من العمليات الفسيولوجية ، بما في ذلك نشاط الجهاز العصبي اللاإرادي ومحور الغدة النخامية وقشر الكظر (HPA). يلعب الفرع السمبثاوي للجهاز العصبي اللاإرادي دورًا رئيسيًا في الحفاظ على نغمة الأوعية الدموية القاعدية و TPR [64 ، 65] ونغمة السمبثاوي المرتفعة مسؤولة عن تطوير وصيانة العديد من أشكال ارتفاع ضغط الدم [66]. حتى الآن ، لم يُظهر أن الشعور بالوحدة يرتبط بنشاط SNS في عضلة القلب (أي ، فترة ما قبل القذف [21 ، 56]) ولكنه كان مرتبطًا بتركيز أكبر من الإبينفرين في عينات البول طوال الليل لدى البالغين في منتصف العمر وكبار السن. عينة [21]. في التركيزات العالية ، يرتبط الأدرينالين المتداول ومستقبلات # x003b1-1 على خلايا العضلات الملساء الوعائية لإحداث تضيق الأوعية وبالتالي يمكن أن يعمل كآلية لزيادة SBP في الأفراد الوحيدين.

      يتضمن تنشيط محور HPA سلسلة من الإشارات التي تؤدي إلى إطلاق ACTH من الغدة النخامية والكورتيزول من قشرة الغدة الكظرية. تدين سلامة الأوعية الدموية ووظائفها ، جزئيًا ، بالنشاط الجيد التنظيم لمحور HPA. يساهم عدم تنظيم محور HPA في العمليات الالتهابية التي تلعب دورًا في ارتفاع ضغط الدم وتصلب الشرايين وأمراض القلب التاجية [67 & # x0201369]. ارتبط الشعور بالوحدة مع إفراز البول لتركيزات أعلى بكثير من الكورتيزول [70] ، وفي دراسات حديثة ، مع مستويات أعلى من الكورتيزول اللعابي أو البلازما [71 ، 72]. بريسمان وآخرون. [72] وجد أن الشعور بالوحدة مرتبط بارتفاع مستويات الكورتيزول المنتشر في الصباح الباكر وفي وقت متأخر من الليل لدى طلاب الجامعات الشباب البالغين ، و Steptoe et al. [71] وجد أن المستويات العالية المزمنة من الشعور بالوحدة في السمات لدى البالغين في منتصف العمر (M = 52.4 سنة) تنبأت بزيادات أكبر في الكورتيزول اللعابي خلال أول 30 دقيقة بعد الاستيقاظ (أي استجابة إيقاظ الكورتيزول) مثل استجابة الكورتيزول التي تستيقظ لدى الأفراد في أعلى درجة من الشعور بالوحدة كانت tertile أعلى بنسبة 21 ٪ من تلك الموجودة في أدنى درجة من Tertile. في دراستنا للبالغين في منتصف العمر وكبار السن ، ارتبطت التقلبات اليومية في الشعور بالوحدة بالاختلافات الفردية في استجابة إيقاظ الكورتيزول. بالنسبة لهذه الدراسة ، تم الانتهاء من تقارير اليوميات للحالات النفسية والاجتماعية والعاطفية والجسدية اليومية في وقت النوم في كل يوم من الأيام الثلاثة المتتالية ، وتم قياس مستويات الكورتيزول اللعابي عند الاستيقاظ ، وبعد 30 دقيقة من الاستيقاظ ، وفي وقت النوم كل يوم. كشفت النماذج السببية متعددة المستويات المتوازية أن الشعور بالوحدة في اليوم السابق وما يرتبط به من مشاعر الحزن والتهديد ونقص السيطرة كان مرتبطًا باستجابة إيقاظ الكورتيزول العالية في اليوم التالي ، لكن استجابة إيقاظ الكورتيزول الصباحية لم تتنبأ بتجارب هذه الحالات النفسية الاجتماعية لاحقًا. نفس اليوم [73]. من المعروف أن التهديد التقييمي الاجتماعي هو عامل قوي للكورتيزول [74] ، وتتوافق نظريتنا القائلة بأن الوحدة تتميز بالتهديد المزمن واليقظة المفرطة للتقييم الاجتماعي السلبي [9] مع النتيجة التي تفيد بأن الوحدة تتنبأ بزيادة استجابة إيقاظ الكورتيزول. إن أهمية الارتباط بين الوحدة وتنظيم HPA جدير بالملاحظة بشكل خاص نظرًا للأدلة الحديثة على أن التغييرات المرتبطة بالوحدة في نشاط HPA قد تحدث على مستوى الجين ، وهو موضوع ننتقل إليه بعد ذلك.

      تأثيرات الجينات

      ينظم الكورتيزول مجموعة واسعة من العمليات الفسيولوجية عن طريق التحكم بوساطة مستقبلات الهرمونات النووية في نسخ الجينات. تنشيط الكورتيزول لمستقبلات الجلوكوكورتيكويد ، على سبيل المثال ، يمارس تأثيرات واسعة مضادة للالتهابات عن طريق تثبيط مسارات الإشارات المؤيدة للالتهابات. بالنظر إلى أن الوحدة مرتبطة بارتفاع مستويات الكورتيزول ، فمن المتوقع أن تقلل الوحدة من خطر الإصابة بالأمراض الالتهابية. ومع ذلك ، كما أشرنا أعلاه ، ترتبط مشاعر الوحدة والعزلة الاجتماعية بزيادة خطر الإصابة بمرض التهابي. قد يُعزى هذا الاكتشاف إلى ضعف نقل الإشارات بوساطة مستقبلات الجلوكوكورتيكويد في الجينوم الخلوي إلى & # x0201chear & # x0201d الإشارة المضادة للالتهابات المرسلة عن طريق تداول الجلوكوكورتيكويد التي تسمح للعمليات الالتهابية بالاستمرار دون رادع نسبيًا. وجدنا دليلًا متوافقًا مع عدم الحساسية للجلوكوكورتيكويد في فحصنا لمعدلات التعبير الجيني لدى كبار السن الذين يعانون من الوحدة المزمنة مقابل كبار السن المرتبطين اجتماعياً [75]. كشفت تحليلات ميكروأري على مستوى الجينوم أن 209 نسخة ، تمثل 144 جينًا متميزًا ، تم التعبير عنها بشكل مختلف في هاتين المجموعتين. تم التعبير عن علامات التنشيط المناعي والالتهاب (على سبيل المثال ، السيتوكينات المؤيدة للالتهابات والوسطاء الالتهابيين) بشكل مفرط في جينات الشخص الوحيد بالنسبة للمجموعة المرتبطة اجتماعيًا (37 ٪ من 209 النصوص المعبر عنها تفاضليًا). تم التعبير عن علامات مثبطات دورة الخلية ومثبط للنسخة القوية المؤيدة للالتهابات NF & # x02013 & # x003baB في جينات الوحدة ذات الصلة بالمجموعة المرتبطة اجتماعيًا (63 ٪ من النصوص المعبر عنها تفاضليًا). فضل الأثر الوظيفي الصافي للنسخ الجيني التفاضلي زيادة دورة الخلية والالتهاب في المجموعة الوحيدة [75].

      أشارت تحليلات المعلومات الحيوية اللاحقة إلى أن الاختلافات المرتبطة بالوحدة في التعبير الجيني يمكن أن تُعزى إلى زيادة نشاط عامل النسخ NF & # x02013 & # x003baB. من المعروف أن NF & # x02013 & # x003baB ينظم الجينات المرتبطة بالالتهاب ، ويقاوم نشاطه مستقبلات الجلوكوكورتيكويد. أشارت تحليلات المعلومات الحيوية أيضًا إلى انخفاض محتمل في النسخ بوساطة مستقبلات الجلوكوكورتيكويد في المجموعة الوحيدة ، على الرغم من عدم وجود فروق جماعية في مستويات الجلوكوكورتيكويد المنتشرة. تتوافق هذه النتائج مع الفرضية القائلة بأن الظروف الاجتماعية المعاكسة تؤدي إلى إزالة التحسس الوظيفي لمستقبلات الجلوكوكورتيكويد ، مما يسمح بزيادة نشاط NF & # x02013 & # x003baB وبالتالي يؤدي إلى تحيز مؤيد للالتهابات في التعبير الجيني. لم تُعزى الاختلافات الجماعية في NF & # x02013 & # x003baB / نشاط النسخ بوساطة مستقبلات الجلوكوكورتيكويد إلى مؤشرات موضوعية للعزلة الاجتماعية ، ولم يتم تفسيرها من خلال العوامل الديموغرافية والنفسية الاجتماعية (أي الإجهاد المتصور ، والاكتئاب ، والعداء) ، أو عوامل الخطر الطبية [75 ]. تشير هذه النتائج إلى أن الشعور بالوحدة قد يكون له تأثير نسخ فريد له صلة محتملة بالصحة.

      في امتداد لهذا العمل ، أظهرت دراسة حديثة أن مشاعر العزلة الاجتماعية كانت مرتبطة بمقياس بديل لحساسية الجلوكوكورتيكويد الوظيفية [76]. يخضع تكوين عدد الكريات البيض في الدورة الدموية للتأثير التنظيمي للقشرانيات السكرية ، حيث تزيد مستويات الكورتيزول المرتفعة من تركيزات العَدِلات المتداولة وتقلل في نفس الوقت تركيزات الخلايا الليمفاوية والخلايا الأحادية. في دراسة أجريت على كبار السن من التايوانيين ، انعكست هذه العلاقة في علاقة إيجابية بين مستويات الكورتيزول ونسبة نسب العدلات بالنسبة إلى النسب المئوية للخلايا الليمفاوية أو الخلايا الوحيدة. ومع ذلك ، في الأفراد الوحيدين ، كان هذا الارتباط ضعيفًا وغير مهم ، بما يتفق مع انخفاض تأثير الكورتيزول على مستوى الكريات البيض.

      لم يتم بعد تحديد الموقع الجزيئي الدقيق لحساسية الجلوكوكورتيكويد في سلسلة النسخ المؤيدة للالتهابات ، وهناك حاجة إلى مزيد من البحث الطولي والتجريبي لتحديد الدرجة التي تلعب بها المشاعر المزمنة للعزلة الاجتماعية دورًا سببيًا في التعبير الجيني التفاضلي. ومع ذلك ، فإن الارتباط بين العزلة الاجتماعية الذاتية والتعبير الجيني يتوافق جيدًا مع اختلافات التعبير الجيني في النماذج الحيوانية للعزلة الاجتماعية (على سبيل المثال ، [77 & # x0201379]) ، مما يشير إلى أن الإحساس الذاتي بالترابط الاجتماعي مهم للتعبير الجيني والتنظيم المناعي الطبيعي في البشر. يوفر النسخ الضعيف لجينات الاستجابة للجلوكوكورتيكويد وزيادة نشاط مسارات التحكم في النسخ المؤيدة للالتهابات تفسيرًا جينوميًا وظيفيًا لارتفاع خطر الإصابة بمرض التهابي لدى الأفراد الذين يعانون من مستويات عالية مزمنة من الشعور بالوحدة.

      عمل المناعة

      تمتد الاختلافات في الشعور بالوحدة في تنظيم المناعة إلى ما هو أبعد من عمليات الالتهاب. ارتبط الشعور بالوحدة بضعف المناعة الخلوية كما ينعكس في انخفاض نشاط الخلايا القاتلة الطبيعية (NK) وزيادة عيار الأجسام المضادة لفيروس إبشتاين بار وفيروسات الهربس البشري [70، 80 & # x0201382]. بالإضافة إلى ذلك ، ارتبط الشعور بالوحدة بين البالغين في منتصف العمر بزيادة أصغر في أعداد الخلايا القاتلة الطبيعية استجابةً للإجهاد الحاد لمهمة Stroop ومهمة تتبع المرآة [71]. في البالغين الشباب ، ارتبط الشعور بالوحدة باستجابة ضعيفة للأجسام المضادة لأحد مكونات لقاح الأنفلونزا [72] ، مما يشير إلى أن الاستجابة المناعية الخلطية قد تضعف أيضًا لدى الأفراد الوحيدين. بين الرجال الحاملين لفيروس نقص المناعة البشرية غير المصابين بالإيدز ، ارتبط الشعور بالوحدة بانخفاض عدد الخلايا الليمفاوية التائية CD4 في إحدى الدراسات [83] ولكنه لم يرتبط بعدد CD4 في دراسة أخرى [84]. ومع ذلك ، في الدراسة الأخيرة ، تنبأ الشعور بالوحدة بمعدل أبطأ من الانخفاض في مستويات الخلايا الليمفاوية التائية CD4 على مدى 3 سنوات [84]. تشير هذه البيانات إلى أن الشعور بالوحدة يحمي من تطور المرض ، ولكن لم يلاحظ أي ارتباط بين الوحدة ووقت تشخيص الإيدز أو الوفيات المرتبطة بالإيدز [84]. هناك حاجة إلى مزيد من البحث لفحص دور الوحدة المزمنة والعمر وسياق ضغوط الحياة والميول الوراثية والتفاعلات بين هذه العوامل لتحديد متى وكيف تعمل الوحدة على إضعاف وظائف المناعة.


      لغز كيفية حل مشكلة العزلة الاجتماعية مع الدماغ

      توصل بحث جديد إلى أن العزلة الاجتماعية لدى الشباب قد تعيث فسادا في الدماغ من خلال تعطيل بروتين مهم لتنمية الخلايا الداعمة للجهاز العصبي.

      وجدت دراسة جديدة أجريت على الفئران أنه عندما يتم عزل الحيوانات خلال فترة مبكرة حرجة ، فإن خلايا الدماغ التي تسمى الخلايا الدبقية قليلة التغصن تفشل في النضج بشكل صحيح. تبني الخلايا الدبقية قليلة التغصن أغشية دهنية عازلة تحمي الخلايا العصبية ، ويبدو أن خللها يؤدي إلى تغيرات سلوكية طويلة الأمد.

      أظهرت الأبحاث التي أجريت على قرود الريسوس والبشر أن العزلة الاجتماعية أثناء الطفولة لها مجموعة من الآثار السيئة التي تدوم مدى الحياة ، من المشكلات المعرفية والاجتماعية لدى الأطفال المهملين إلى مشاكل الذاكرة العاملة في القرود المنعزلة. يُظهر هؤلاء الأطفال والقرود أيضًا تشوهات في المادة البيضاء في الدماغ ، والتي تشمل الخلايا الداعمة مثل الخلايا قليلة التغصن بالإضافة إلى الإسقاطات العصبية المغطاة بالدهون والتي تعمل كنظام اتصال في الدماغ.

      لكن بينما أشارت الدراسات السابقة إلى وجود علاقة بين مشاكل المادة البيضاء والصراعات المعرفية بعد العزلة ، لم تتمكن من إثبات أن أحدهما يسبب الآخر. أراد غابرييل كورفاس ، أستاذ طب الأعصاب وطب الأنف والأذن والحنجرة في مستشفى بوسطن للأطفال وكلية الطب بجامعة هارفارد ، وزملاؤه فهم كيفية عمل هذه العلاقة. أخذوا الفئران الصغيرة من أمهاتهم في عمر 21 يومًا ، بعد الفطام مباشرة. تم وضع بعض الفئران الصغيرة في ظروف معملية نموذجية ، حيث تعيش في قفص مع ثلاثة فئران أخرى. أعطيت مجموعة أخرى بيئة غنية ، مع الكثير من الشركات الفاسدة ومجموعة دائمة التغير من الألعاب. تم وضع المجموعة الأخيرة من الفئران في عزلة فردية لمدة أسبوعين ، ولم ترَ أبدًا أي قوارض أخرى.

      آثار العزلة

      في عمر 50 يومًا ، تم اختبار الفئران للتواصل الاجتماعي والذاكرة العاملة. تمشيا مع النتائج السابقة ، كافحت الفئران المعزولة مع كليهما ، في حين أن الفئران المخصبة والبيئة العادية كانت تعمل بشكل جيد. بعد فترة وجيزة ، فحص الباحثون أدمغة المجموعات الثلاث بحثًا عن أي تشوهات. [أهم 10 اضطرابات نفسية مثيرة للجدل]

      لم يجدوا أي مشاكل في البيئة العادية وفئران البيئة المخصبة. لكن الحيوانات التي تُركت بمفردها كان لديها خلايا قليلة التغصن غريبة وعرة. عادة ما يكون لهذه الخلايا نتوءات طويلة ومعقدة (تسمى محاور عصبية) تمتد تقريبًا مثل جذور الأشجار. ومع ذلك ، في الفئران المعزولة ، كانت إسقاطات oligodendrocyte قصيرة وبسيطة ، دون تعقيدها المعتاد.

      علاوة على ذلك ، كان لدى الفئران المعزولة أغلفة واقية رقيقة حول هذه المحاور العصبية ، وهي الإسقاطات التي تستخدمها خلايا الدماغ للتواصل. تساعد هذه الأغماد ، المصنوعة من مادة دهنية تسمى المايلين ، على عزل المحاور وتسريع الثرثرة بين الخلايا العصبية.

      تغيير الدماغ

      بعد ذلك ، ذهب كورفاس وزملاؤه للبحث عن سبب تلف المادة البيضاء. كشفت الأبحاث السابقة عن وجود صلة محتملة ، وإن كانت مثيرة للجدل إلى حد ما ، بين خلل في المادة البيضاء وسلسلة اتصالات جزيئية تسمى ErbB. تحتوي الخلايا قليلة التغصن على مستقبلات تسمى ErbB3 ، والتي تستجيب لبروتين يسمى neuregulin-1 ، وتشارك في سلسلة الاتصالات تلك.

      أولاً ، حددوا الفترة الحاسمة لنضج الخلايا الدبقية قليلة التغصن في قشرة الفص الجبهي ، وهي منطقة الدماغ المرتبطة بالتخطيط والتفكير عالي المستوى والتفاعل الاجتماعي. في الفئران ، تتراوح هذه الفترة بين 21 و 35 يومًا من العمر. ثم قام الباحثون بتعطيل مستقبلات ErbB3 على الخلايا الدبقية قليلة التغصن ، لذلك بغض النظر عن كمية النوريجولين -1 التي ينتجها الجسم ، لا يمكن للرسالة الوصول إليها. النتيجة؟ تصرفت الفئران اجتماعيًا وسلوكيًا ، كما لو كانت معزولة و [مدش] على الرغم من أنها لم تفعل ذلك من قبل.كما أدى الاضطراب إلى تقليد ترقق ميلين (المادة الدهنية التي تحمي المحاور) الناتجة عن العزلة. [صور مذهلة: داخل الدماغ]

      "تشير إلى أن قدرة إشارات ErbB للخلايا قليلة التغصن ضرورية لقشرة الفص الجبهي التي تمتص فوائد التفاعل الاجتماعي خلال فترة الأحداث هذه ،" Corfas ، الذي ينتمي أيضًا إلى F.M. قال مركز كيربي لعلم الأعصاب في مستشفى بوسطن للأطفال ، لـ LiveScience.

      يشك الباحثون الآن في أن العزلة الاجتماعية تقلل بطريقة ما من كمية العصبرين -1 في الدماغ ، مما يؤدي إلى مشاكل الخلايا الدبقية قليلة التغصن والمايلين.

      بعد ذلك ، قال كورفاس ، الهدف هو فهم أي وجه من جوانب العزلة مسؤول عن التغييرات وكيف تعمل العزلة على تغيير إنتاج neuregulin-1. قال كورفاس إن بعض التغييرات الميالينية الناتجة عن العزلة تظهر أيضًا في المرضى الذين يعانون من اضطراب ثنائي القطب وانفصام الشخصية ، مما يجعل المشروع واعدًا بعدد من الاضطرابات العصبية والنفسية.

      وقال: "لقد ثبت أن الجينات التي نعمل معها مرتبطة بهذه الاضطرابات ، كما ثبت ارتباط عيوب المادة البيضاء بهذه الاضطرابات أيضًا". "لذا يعمل مختبرنا والمحققون الآخرون على محاولة فهم كيفية ارتباط هذه المسارات وهذه الحساسيات الجينية بإحداث اضطرابات نفسية عصبية."


      آثار العزلة الاجتماعية على شبكات ما حول العصبونات في اللوزة بعد مهمة إغفال مكافأة في إناث الجرذان

      الإلحاح السلبي هو أحد جوانب الاندفاع المرتبط بالتأثير السلبي والسلوك المحفوف بالمخاطر الذي قد يشمل اللوزة. حددت الدراسة الحالية ما إذا كانت العزلة الاجتماعية أثناء التطور تغير الإلحاح السلبي ونشاط c-Fos في اللوزة القاعدية الوحشية (BLA). تمت تربية فئران Sprague-Dawley في حالة معزولة (IC) ، أو حالة اجتماعية قياسية (SC) ، أو حالة مخصبة (EC) ثم تم اختبارها من أجل النشاط الحركي ، وتفضيل مكان الجدة ، والإلحاح السلبي باستخدام مهمة إغفال المكافأة . بعد الأداء في مهمة إغفال المكافأة ، تم تحليل الأدمغة لتعبير c-Fos في Ca 2+ / calodulin kinase II (CaMKII) وخلايا calbindin (CB) ، وكذلك في الخلايا العصبية parvalbumin (PV) المرتبطة بشبكات حول العصبونات (PNNs) ) في BLA. أظهرت جرذان IC حركة محسّنة مقارنة بكل من فئران SC و EC ، بالإضافة إلى تفضيل مكان جديد محسّن مقارنةً بفئران EC ، أظهرت الفئران IC فقط زيادة في الاستجابة بعد إغفال المكافأة المتوقعة (الإلحاح السلبي). بعد الانتهاء من مهمة إغفال المكافأة ، عرضت فئران IC أيضًا نسبة مئوية متزايدة من الخلايا العصبية c-Fos في BLA المرتبطة بالخلايا العصبية CaMKII و CB و PV مقارنة بالفئران SC و EC. في فئران IC ، حدث تنشيط c-Fos في BLA بعد إغفال المكافأة المتوقعة. أخيرًا ، أظهرت فئران IC انخفاض شدة PNN المرتبطة بالخلايا العصبية الكهروضوئية مقارنة بفئران EC ، لكن النسبة المئوية لهذه الخلايا العصبية التي تعبر عن c-Fos كانت أكبر في فئران IC كانت الفئران SC وسيطة بين الفئران IC و EC. لوحظ الإلحاح السلبي في فئران IC ، ولكن ليس فئران SC أو EC. بينما من المحتمل أن تشارك آليات متعددة ، فقد ارتبط هذا التأثير السلوكي بزيادة نشاط الخلايا العصبية الاستثارة في BLA بفعل العزلة ، بالإضافة إلى انخفاض شدة PNN المحيطة بالخلايا العصبية GABAergic في نفس المنطقة.

      هذه معاينة لمحتوى الاشتراك ، والوصول عبر مؤسستك.


      المواد والأساليب

      وسائط

      تم استخدام العديد من الوسائط للتعامل مع البويضات والأجنة. احتوى الوسط الأبيض على 109.51 ملي مول كلوريد الصوديوم ، 4.78 ملي مول كلوريد ، 1.19 ملي مول كلوريد الصوديوم2ص4، 1.19 ملي MgSO4، 22.62 ملي مول ناهكو3، 5.55 مم D- الجلوكوز ، 0.31 ملي بيروفات الصوديوم ، 1.49 ملي لاكتات الكالسيوم ، 0.075 مجم / مل بنسلين الصوديوم ، 0.05 مجم / مل كبريتات الستربتومايسين ، و 3 مجم / مل من BSA [17].

      احتوى وسط CZB الخالي من الجلوكوز على 81.62 ملي مول كلوريد الصوديوم ، 4.83 ملي مول كلوريد ، 1.18 ملي مولار كلوريد الهيدروجين2ص4، 1.18 ملم MgSO4، 25.12 ملم ناكو3، 1.7 ملي كلوريد الكالسيوم2، 6.9 ملي تورين ، 0.11 ملي EDTA · 2Na ، 0.27 ملي بيروفات الصوديوم ، 31.3 ملي مولار حمض اللاكتيك (ملح الصوديوم ، 60٪ شراب) ، 0.075 مجم / مل بنسلين- G ، 0.05 مجم / مل ستربتومايسين ، و 3 مجم / مل جيش صرب البوسنة [18].

      يتكون الوسط المستخدم للنفاذية الكهربائية من 0.25 مولار-جلوكوز ، 100 ميكرومتر من الكالسيوم20.2 ح2O ، 100 ميكرومتر MgSO4، 0.1٪ PVP ، و 10 ملم BrUTP (سيجما ، سانت لويس ، ميزوري).

      جمع وثقافة البويضات والأجنة

      الفئران الإناث ، 21-23 يومًا من العمر (BDF1 SLC ، شيزوكا ، اليابان) ، تمت إباضتها ب 5 وحدات دولية من موجهة الغدد التناسلية المشيمية للخيول (eCG Sankyo Co.، Ltd. ، طوكيو ، اليابان) وبعد 48 ساعة ، مع 5 IU من موجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية (hCG Sankyo Co.). تم جمع البويضات في وسط Whitten من أمبولة قناة البيض في 15-16 ساعة بعد حقن قوات حرس السواحل الهايتية. تم الحصول على الحيوانات المنوية في وسط Whitten من البربخ الذنب من ذكور فأر ICR الناضج (SLC). تم تلقيح البويضات بالحيوانات المنوية المكثفة التي تم تحضينها لمدة ساعتين عند 38 درجة مئوية. تم غسل الأجنة باستخدام وسط CZB خالٍ من الجلوكوز 2.5 ساعة بعد التلقيح ثم تم تربيتها في ثاني أكسيد الكربون المرطب بنسبة 5٪.2/ 95٪ جو هواء عند 38 درجة مئوية. تمت مراجعة جميع الإجراءات الموضحة هنا والموافقة عليها من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسية بجامعة طوكيو وتم إجراؤها وفقًا للمبادئ التوجيهية لرعاية واستخدام حيوانات المختبر.

      فحص وفرة الرنا المرسال باستخدام النسخ العكسي شبه الكمي ، في الوقت الحقيقي ، والازدهار مراقبته- PCR

      تم قياس وفرة نصوص mRNA المحددة باستخدام النسخ العكسي- PCR (RT-PCR). تم عزل إجمالي الحمض النووي الريبي من البويضات والأجنة غير المخصبة باستخدام ISOGEN (Nippon Gene ، طوكيو ، اليابان) وعكس النسخ في خليط تفاعل 20 ميكرولتر يحتوي على 5 U من ReverScript II (Wako ، أوساكا ، اليابان) و 0.5 ميكروغرام من oligo (dT). ) 12-18 برايمر (Invitrogen Corp. ، كارلسباد ، كاليفورنيا) عند 42 درجة مئوية لمدة ساعة و 51 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. تم هضم القالب mRNA باستخدام 60 وحدة من RNase H (TaKaRa ، Shiga ، اليابان) عند 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.

      تم تحديد كميات cDNAs المحددة بواسطة PCR في الوقت الحقيقي باستخدام نظام Smart Cycler (TaKaRa) كما هو موضح سابقًا [19]. باختصار ، يتكون خليط التفاعل من (كدنا) ، 0.2 ميكرومتر من كل أساس ، 300 ميكرومتر dNTP ، 3 ملي مول كلوريد2، و 0.05 U / ميكرولتر TaKaRa Ex Taq DNA polymerase (TaKaRa). تسلسل بادئات PCR المستخدمة موضحة في الجدول 1. تمت إضافة صبغة DNA مزدوجة الشريطة SYBR Green I (تطبيقات BioWhittaker Molecular Applications ، Rockland) للسماح بمراقبة منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي. تم إجراء PCR باستخدام 35 دورة ، تتكون من تمسخ عند 95 درجة مئوية لمدة 15 ثانية ، الصلب عند درجات الحرارة الموضحة في الجدول 1 لمدة 15 ثانية ، والتمديد عند 72 درجة مئوية لمدة 20 ثانية ، وقياس التألق عند درجات الحرارة الموضحة في الجدول 1 لمدة 6 ثوان. تم ضبط درجة حرارة التلدين على درجة الحرارة تلك التي أنتجت نطاقًا واحدًا عند الرحلان الكهربي لمنتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي

      تفاصيل شروط PCR.

      اسم . التمهيدي. تسلسل التمهيدي. درجة الحرارة (° C) التلدين / القياس.
      α- غلوبين يشعر 5′-جكاجككاكجتجكجاجتات -3 ′ 58.0/91.0
      α- غلوبين مضاد المعنى 5′-GTGGACAGGAGCTTGAAAT-3 ′
      eIF-1A يشعر 5′-AAGAAGTCTGAAGGCCTATG-3 ′ 57.0/82.8
      eIF-1A مضاد المعنى 5′-CAGAGAACTTGGAAGGTAGC-3 ′
      MuERV يشعر 5′-TTCTCAAGGCCCACCAATAGT-3 ′ 59.0/83.0
      MuERV مضاد المعنى 5′-GACACCTTTTTAACTATGCGAGCT-3 ′
      سيكلين يشعر 5′-GAGGTGGAGAAGAATATAA-3 ′ 56.0/84.0
      سيكلين مضاد المعنى 5′-ACTAGGTGCTCCATTCTCAG-3 ′
      β-أكتين يشعر 5′-GTGGGCCGCTCTAGGCACAA-3 ′ 63.5/89.5
      β-أكتين مضاد المعنى 5′-CTCTTGATGTCACGCACGATTTC-3
      اسم . التمهيدي. تسلسل التمهيدي. درجة الحرارة (° C) التلدين / القياس.
      α- غلوبين يشعر 5′-جكاجككاكجتجكجاجتات -3 ′ 58.0/91.0
      α- غلوبين مضاد المعنى 5′-GTGGACAGGAGCTTGAAAT-3 ′
      eIF-1A يشعر 5′-AAGAAGTCTGAAGGCCTATG-3 ′ 57.0/82.8
      eIF-1A مضاد المعنى 5′-CAGAGAACTTGGAAGGTAGC-3 ′
      MuERV يشعر 5′-TTCTCAAGGCCCACCAATAGT-3 ′ 59.0/83.0
      MuERV مضاد المعنى 5′-GACACCTTTTTAACTATGCGAGCT-3 ′
      سيكلين يشعر 5′-GAGGTGGAGAAGAATATAA-3 ′ 56.0/84.0
      سيكلين مضاد المعنى 5′-ACTAGGTGCTCCATTCTCAG-3 ′
      β-أكتين يشعر 5′-GTGGGCCGCTCTAGGCACAA-3 ′ 63.5/89.5
      β-أكتين مضاد المعنى 5′-CTCTTGATGTCACGCACGATTTC-3

      تفاصيل شروط PCR.

      اسم . التمهيدي. تسلسل التمهيدي. درجة الحرارة (° C) التلدين / القياس.
      α- غلوبين يشعر 5′-جكاجككاكجتجكجاجتات -3 ′ 58.0/91.0
      α- غلوبين مضاد المعنى 5′-GTGGACAGGAGCTTGAAAT-3 ′
      eIF-1A يشعر 5′-AAGAAGTCTGAAGGCCTATG-3 ′ 57.0/82.8
      eIF-1A مضاد المعنى 5′-CAGAGAACTTGGAAGGTAGC-3 ′
      MuERV يشعر 5′-TTCTCAAGGCCCACCAATAGT-3 ′ 59.0/83.0
      MuERV مضاد المعنى 5′-GACACCTTTTTAACTATGCGAGCT-3 ′
      سيكلين يشعر 5′-GAGGTGGAGAAGAATATAA-3 ′ 56.0/84.0
      سيكلين مضاد المعنى 5′-ACTAGGTGCTCCATTCTCAG-3 ′
      β-أكتين يشعر 5′-GTGGGCCGCTCTAGGCACAA-3 ′ 63.5/89.5
      β-أكتين مضاد المعنى 5′-CTCTTGATGTCACGCACGATTTC-3
      اسم . التمهيدي. تسلسل التمهيدي. درجة الحرارة (° C) التلدين / القياس.
      α- غلوبين يشعر 5′-جكاجككاكجتجكجاجتات -3 ′ 58.0/91.0
      α- غلوبين مضاد المعنى 5′-GTGGACAGGAGCTTGAAAT-3 ′
      eIF-1A يشعر 5′-AAGAAGTCTGAAGGCCTATG-3 ′ 57.0/82.8
      eIF-1A مضاد المعنى 5′-CAGAGAACTTGGAAGGTAGC-3 ′
      MuERV يشعر 5′-TTCTCAAGGCCCACCAATAGT-3 ′ 59.0/83.0
      MuERV مضاد المعنى 5′-GACACCTTTTTAACTATGCGAGCT-3 ′
      سيكلين يشعر 5′-GAGGTGGAGAAGAATATAA-3 ′ 56.0/84.0
      سيكلين مضاد المعنى 5′-ACTAGGTGCTCCATTCTCAG-3 ′
      β-أكتين يشعر 5′-GTGGGCCGCTCTAGGCACAA-3 ′ 63.5/89.5
      β-أكتين مضاد المعنى 5′-CTCTTGATGTCACGCACGATTTC-3

      تم تحديد الكميات النسبية لكل (كدنا) في العينات باستخدام منحنى معياري (كدنا) تم الحصول عليه عن طريق تضخيم سلسلة تخفيف 10 أضعاف من (كدنا) لرقم نسخة معروف تم تحضيره بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل. لتحديد عدد نسخ cDNAs ، تمت تنقية منتجات PCR لمنحنى معيار cDNA باستخدام نظام PCR Clean-Up System (Promega ، Madison ، WI) ، وتم قياس التركيز على مقياس الطيف الضوئي ، وكان عدد النسخ. محسوب.

      إعداد مرنا التحكم المسمى BrU وحظر مرنا غير المسمى

      تم عكس الأرنب α-globin mRNA (Sigma) باستخدام a دراأنا راسية T30 oligo-dT التمهيدي والمستنسخ الفرعي في pGEM-T Easy Vector (Promega). تم تصنيع α-globin mRNA المسمى BrU في المختبر من البناء الخطي باستخدام SP6 RNA polymerase (روش ، مانهايم ، ألمانيا) مع BrUTP في مزيج النيوكليوتيدات.

      تم تقديم بلازميد يحتوي على منطقة ترميز جين interferon- غنم في ناقل pGEM-T Easy Vector بواسطة الدكتور K. Imakawa والدكتور H. Nojima. تم استخدام البلازميد الخطي كقالب لتخليق mRNA غير المسمى الذي تم استخدامه كعامل مانع في تجارب الترسيب المناعي.

      عزل مرنا الوليدة عن طريق الترسيب المناعي بعد وضع العلامات على BrUTP

      تم غسل الأجنة جيدًا مرتين في وسط نفاذية كهربائية (EP). تم نقلهم بعد ذلك إلى غرفة الاندماج بين الأقطاب الكهربائية ، ومغطاة بقطرة 100 ميكرولتر من وسط EP تحتوي على 10 ملي مولار من BrUTP ، وتم نفاذها باستخدام نبضتين كهربائيتين من 13 إلى 500 ميكرو ثانية بجهد خرج 1500 فولت / مم ، مع 2 - فاصل زمني دقيق بين النبضات. بعد دقيقتين من النفاذية ، تم غسل BrUTP الزائد من الخلايا ، وتم تربيته في وسط CZB عند 38 درجة مئوية في 5٪ من ثاني أكسيد الكربون.2 الغلاف الجوي حتى الاستخدام. تم تقسيم الأجنة إلى مجموعتين: إحداهما استخدمت لعزل mRNA الوليدة التي تتضمن BrU والأخرى تم استخدامها للتحقق من كفاءة تحميل BrUTP عن طريق التحصين المناعي لتأكيد أن BrU قد تم دمجها بنجاح في جميع الأجنة تقريبًا.

      تم تحضير إجمالي الحمض النووي الريبي من الأجنة المحملة بـ BrUTP باستخدام ISOGEN (Nippon Gene) كما هو موضح أعلاه. تم عزل mRNA الناشئ مع دمج BrU من إجمالي الحمض النووي الريبي عن طريق الترسيب المناعي باستخدام 20 ميكرولتر من حبات البروتين G-Sepharose (Sigma) المرتبطة بجسم مضاد لـ BrdU أحادي النسيلة (Roche ، Indianapolis ، IN) الذي يتعرف أيضًا على BrU. تم استخدام مائة جنين لكل ترسيب مناعي.

      تم تحضير حبات Sepharose عن طريق الغسيل ثلاث مرات في PBS التي تحتوي على 0.1 ٪ polyvinylpyrrolidone (PBS / PVP) وإعادة تعليق الحبيبات النهائية (10 ميكرولتر قسامات) في 20 ميكرولتر من PBS / PVP تحتوي على 2 ميكروغرام من الأجسام المضادة لـ BrdU 500 نانوغرام من غير المسماة تمت إضافة interferon-τ مرنا. تم تحضين الخليط عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة مع اهتزاز لطيف ، وتم غسل الحبيبات ثلاث مرات وتعليقها في 0.2 مل من PBS / PVP.

      تم تغيير طبيعة عينات الحمض النووي الريبي الكلية المعزولة من الأجنة عن طريق التسخين عند 80 درجة مئوية لمدة 10 دقائق ثم إضافتها إلى الخرزات. تم تحضين المخاليط عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة مع اهتزاز لطيف ، ثم تم غسل الحبيبات خمس مرات باستخدام 0.2 مل من PBS / PVP تحتوي على 20 وحدة من RNasin (Promega). تم إعادة تعليق الحبيبات النهائية في 10 ميكرولتر من PBS وتم تسخينها عند 80 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. تم تكوير الحبات مرة أخرى ، واستخدم 10 ميكرولتر من المادة الطافية لتقدير مرنا بواسطة RT-PCR في الوقت الحقيقي. أثناء إجراء ترسيب RNA ، تم تضمين 500 نانوغرام من interferon-τ mRNA غير المسمى كعامل مانع. تم صنع جميع المحاليل في مياه معالجة ببيوكربونات ثنائي إيثيل. للتحكم في الخلفية ، خضعت الأجنة لنفس الإجراء الموصوف أعلاه باستثناء النفاذية الكهربائية ، وتم طرح القيمة التي تم الحصول عليها من هذه الأجنة.

      الكشف المناعي للـ mRNA المتضمن BrUTP في الخلايا

      تم إجراء الفحص المجهري المناعي للكشف عن الرنا المرسال الناشئ الذي يتضمن BrU داخل الأجنة. بعد ساعة واحدة من تحميل BrUTP ، تم إصلاح الأجنة لمدة ساعة واحدة مع نسبة 3.7٪ من بارافورمالدهيد في PBS / PVP. بعد الغسل باستخدام PBS / PVP ، تم تحضين الأجنة باستخدام الجسم المضاد لـ BrdU (التخفيف 1:50) لمدة 60 دقيقة ثم باستخدام الأجسام المضادة للفيروس المقترن بالفلورسين (FITC) (1: 500 تخفيف جاكسون ImmunoResearch Laboratories ، West Grove ). تم تركيب الخلايا على شرائح زجاجية باستخدام VectaShield (Vector Laboratories ، Burlingame ، CA) وتم ملاحظتها باستخدام مجهر مسح ليزر متحد البؤر (LSM510 Carl Zeiss ، طوكيو ، اليابان). تم تحليل شدة التألق في النواة ، كما هو موضح سابقًا [20].

      تحليل احصائي

      تم تحليل البيانات من قبل الطالب ر-test ، مع تحديد الأهمية في ص & لتر 0.05.


      الدماغ والسلوك والوسائط

      سلسلة علم نفس التعلم في لوسكين ، رقم 1

      لا يزال التأثير الدراماتيكي لوسائل الإعلام الاجتماعية ، وأجهزة الكمبيوتر ، والهاتف ، والتلفزيون ، والأفلام ، والإنترنت سريعة النمو ، يفاجئنا جميعًا. من بين أكثر التطورات الرائعة ما نتعلمه من أبحاث الدماغ باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI). تكشف النتائج عن نتائج محددة تؤثر على الدماغ والسلوك.

      علم نفس الإعلام هو الآن تخصص فرعي رسمي في مجال علم النفس. مؤخرًا ، في واشنطن العاصمة ، شاركت كعضو في مجلس إدارة القسم 46 ، قسم علم النفس الإعلامي التابع لجمعية علم النفس الأمريكية (APA) ، عندما درسنا بعض المعارف الجديدة حول التأثيرات الجيدة والسيئة للفيديو الألعاب والتعلم عبر الإنترنت وموارد الإنترنت مثل Google و Yahoo والوسائط الأخرى التي يستخدمها معظمنا يوميًا.

      تؤكد الدراسات الحديثة الآن حقيقة اضطراب إدمان الإنترنت (IAD). يمكن أن يسبب IAD الهزات والرعشة والغثيان والقلق لدى بعض المدمنين. يعتبر العديد من المهنيين الآن أن IAD مشابه لتعاطي المخدرات. وهي تشمله من بين السلوكيات المرضية الأخرى ، مثل اضطرابات الأكل والمقامرة. حاول إزالة "لاعب" شاب من إحدى ألعاب الفيديو على عجل. سوف تكتشف مدى صعوبة فك الارتباط بين المراهق والشاشة.

      باختصار ، يستخدم بعض الناس البث ووسائل الإعلام على الإنترنت كملاذ عقلي وعاطفي وملاذ. المدمنون مرتبطون بشاشاتهم عقولهم محاصرة لساعات لاستبعاد العالم من حولهم. يتجاهل المدمنون الأسرة والعمل والدراسات والعلاقات الاجتماعية وأنفسهم.

      هذا هوس إدماني يتمحور حول الإنسان وعمق الشاشة. يمكن العثور على تطبيقات الوسائط التي تغير العقل في ألعاب الفيديو وأجهزة iPod و YouTube وتطبيقات الاتصالات المتطورة الأخرى. بشكل عام ، تتم مناقشة هذه الجوانب السلبية لوسائل الإعلام والسلوك على نطاق واسع بالتزامن مع مناقشة المساهمات المفيدة التي تقدمها وسائل الإعلام كمصدر مهم للتغيير السلوكي الإيجابي.

      ينتج عن الطب عن بُعد والمعالجة عن بُعد والرعاية الصحية عن بُعد معلومات جديدة وفهم أفضل يؤدي إلى تحسين الخدمات للجمهور. تم التحقق من صحة قيمة علم النفس الإيجابي. تساعد الرسائل الإعلامية الإيجابية على تحسين فهم الجمهور للعواقب الاجتماعية والطبية الرئيسية للقضايا التي تؤثر على الجمهور ، مثل وزن الجسم ، والنظام الغذائي ، وعدم ممارسة الرياضة ، وارتفاع نسبة الكوليسترول ، وارتفاع ضغط الدم ، لتسليط الضوء على عدد قليل فقط.

      يقودنا الوعي العام والفهم المتزايد من خلال وسائل الإعلام إلى تغييرات سلوكية إيجابية. يمكن أن يكون علم نفس وسائل الإعلام المطبق على القضايا الاجتماعية الرئيسية قوة من أجل الخير. بالإضافة إلى ذلك ، يساهم نمو تطبيقات الإنترنت الجديدة في المجالات التجارية مثل الشراء عبر الإنترنت والخدمات المصرفية بشكل إيجابي في الاقتصاد العالمي بمعدل مذهل.

      التعليم المرتكز على الإعلام آخذ في الازدياد بسرعة. يتم تحويل التعليم ، من رياض الأطفال إلى الدراسات العليا ، والتعليم المؤسسي ، والتعلم الوظيفي ، من خلال وسائل الإعلام. يعد فن وعلم التدريس والتعلم في البيئات الافتراضية مجالًا عالي التخصص يتطلب الآن فهمًا وخبرة محددة. لقد استمتعت مؤخرًا بالعشاء مع رائد فضاء Apollo Buzz Aldrin ، الذي أعمل معه في مجلس إدارة HiTechHigh ، لوس أنجلوس. تحدثنا عن الوضع الحالي للتعليم والإعلام والتكنولوجيا.

      Buzz ، الحاصل على درجة الدكتوراه. في علم الفضاء من معهد ماساتشوستس للتكنولوجيا ، لاحظ أن "الأطفال اليوم لديهم قوة كمبيوتر في متناول أيديهم لأداء واجباتهم المنزلية أكثر من تلك الموجودة على متن المركبات الفضائية التي حملتنا بقبضة اليد إلى الفضاء." عندما سألت Buzz عما إذا كان هذا أمرًا جيدًا أم سيئًا ، رد قائلاً: "إنه جيد. بالتأكيد".

      تعتبر وسائل الإعلام ووسائل التواصل الاجتماعي من العوامل الموزعة والمحركة للتغيير الاجتماعي. نحن بحاجة إلى فهم متزايد لتأثيرات وسائل الإعلام للمساعدة في إدارة مستقبلنا. يجب أن يتصارع مجتمعنا مع حساسياتنا الثقافية أو الدينية. إذا لم نشكل مستقبلنا ، فسيشكلنا ذلك.

      تأثيرات الوسائط الجيدة:

      • معدلات الذكاء آخذة في الارتفاع ، وفقًا لخدمة اختبار التعليم. يرجع جزء كبير من الزيادة إلى التقدم في التعلم بمساعدة الوسائط واللعب التفاعلي.
      • تتقدم الفتيات في مجال العلوم. تعزو بعض الدراسات هذا إلى زيادة أعداد الإناث اللائي ينخرطن في اللعب التفاعلي.
      • أصبحت العلاقة بين الوسائط والتعلم شائعة بشكل متزايد ، ونحن نتعلم المزيد عن التعلم.
      • التواصل يتزايد عبر الثقافات.
      • ساعدت وسائل الإعلام في تعزيز فهم الجمهور للعديد من القضايا الحاسمة.

      تأثيرات الوسائط السيئة:

        تتناقص المسافات بسبب التعرض للوسائط شديدة التحفيز وسريعة الوتيرة. ظهر ارتباط مباشر بين التعرض لتحفيز الوسائط واضطراب نقص الانتباه (ADD) من البحث.
    2. يتسبب العنف في وسائل الإعلام في إزالة التحسس من العنف. قد تسهل أعمال العنف. قد يكون العنف معديًا عن طريق التعلم القائم على الملاحظة والاتفاق الاجتماعي.
    3. تتخذ الجرائم بمساعدة وسائل الإعلام مثل سرقة الهوية والمواد الإباحية للأطفال أشكالًا جديدة.
    4. ينخفض ​​متوسط ​​عدد ساعات النوم في الليلة بالتناسب العكسي مع متوسط ​​عدد الساعات اليومية لاستخدام الإنترنت.
    5. يتم تشخيص اضطراب إدمان الإنترنت (IAD) بشكل متزايد من قبل المتخصصين.
    6. الاستنتاجات:

      توصلت الأبحاث إلى أن ممارسة ألعاب فيديو الحركة لها تأثير إيجابي ، مما يؤدي إلى تحسين الانتباه البصري. لذلك ، يكشف البحث عن كل من المشاكل والفوائد من العلاقة بين التحفيز الإعلامي والانتباه. المزيد من الدراسة مهم.

      تعد الدراسات الإعلامية ، والإعلام والثقافة ، وعلم نفس الإعلام والاتصالات ، من الأمور المركزية لعالمنا في أوائل القرن الحادي والعشرين. المعرفة الجديدة آخذة في الظهور. نحن نعرف في الوقت الحاضر أكثر مما نفهمه. بصفتنا آباء ومواطنين مسؤولين ، يجب أن "ننتبه".

      يسعدني أن تتاح لي الفرصة لمشاركة بعض المعارف الجديدة من مجال علم النفس الإعلامي ، خاصة فيما يتعلق بالعائلة ، ومناقشة الأسئلة كجزء من جهودنا لخلق مستقبل إيجابي معًا.

      شكر خاص للدكتورة توني لوسكين لمساعدتها في هذا المقال.


      شاهد الفيديو: ماهي الأسباب التي تجعل الإنسان يبتعد عن الآخرين ويفضل العزلة (ديسمبر 2022).